Etude de progéniteurs rythroi͏̈des normaux et pathologiques : signalisation et analyse protéomique

Study of normal and pathological primary erythroid progenitors : signalling and proteomic analysis.

• Auteur / Autrice : Carinne Lecoq-Lafon
• Direction : Catherine Lacombe
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Science de la vie et de la matière. Biochimie et biologie cellulaire
• Date : Soutenance en 2002
• Etablissement(s) : Paris 5

Mots clés

Mots clés contrôlés

Polyglobulie primitive

Érythropoïétine

Résumé

L'Epo et la Tpo contrôlent l'hématopoi͏̈èse et agissent via les récepteurs EpoR et Mpl. La liaison Ligand-récepteur induit la phosphorylation et l'activation de Jak2, des récepteurs eux-me͏̈mes et des voies STAT, MAPK et PI3-K. Nous montrons que les adaptateurs Gab interagissent avec Grb2, Shc, SHP2 en réponse à l'Epo et la Tpo et activent la PI3-K nécessaire au contrôle de l'apoptose, la prolifération et la différenciation. La PV est caractérisée par une hyperplasie érythroi͏̈de. Les mécanismes moléculaires responsables ne sont pas clairement identifiés. Les données actuelles suggèrent une anomalie de la signalisation Epo. A partir de cellules CD34+ médullaires humaines, nous obtenons une population homogène proche des CFU-E. L'analyse protéomique de patients et témoins a été réalisée par des techniques d'électrophorèse bidimensionnelle. Elle a permis d'établir une cartographie protéique et d'identifier 13 protéines différentielles, dont l'analyse en spectrométrie de masse est en cours.

Epo and Tpo regulate hematopoiesis and act by the means of EpoR and Mpl receptor (R). Associating ligand-R induces tyrosine phosphorylation (YP) and activates Jak2, the receptors themselves and the STAT, MAPK and PI3-K pathways. We demonstrate that the Gab scaffold proeins medite EpoR, Mpl signaling and PI3-K activation. In UT7 and in primary hematopoietic cells, Gabs are YP in response to Epo and Tpo. They interact with Grb2, Shc, SHP2 and activate PI3-K pathway which is required for biological responses. PV is characterised by a erythroid hyperplasia. Original molecular mechanisms remain unclear. Data available suggest an abnormal EpoR signaling pathway. From human CD34+ BM cells, we obtain a homogeneous population conformed to CFU-E stage. Proteomic analysis of patients and healthy donors was performed with bidimensional electrophoresis assays. This enabled us to draw-up ''a protein mapping'' and identify differential spots which identification by mass spectrometry is under study.