Contribution à l'étude du transport et de l'assimilation de l'ammonium par les champignons ectomycorhiziens

• Auteur / Autrice : Arnaud Javelle
• Direction : Michel Chalot
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Biologie forestière
• Date : Soutenance en 2002
• Etablissement(s) : Nancy 1
• Partenaire(s) de recherche : autre partenaire : Université Henri Poincaré Nancy 1. Faculté des sciences et techniques

Mots clés

Mots clés contrôlés

Régulation (biologie)

Hebeloma cylindrosporum

Transport biologique actif

Paxille enroulé

Ectomycorhizes

Chimisorption

Ammonium

Résumé

L'étude concerne la caractérisation du transport et de l'assimilation de l'ammonium chez les champignons ectomycorhiziens. La première partie du travail de thèse a consisté à caractériser le transport de l'ammonium du point de vue physiologique (cinétique, énergétique et spécificité), en utilisant un analogue marqué, la ([14C]méthylamine), chez le champignon ectomycorhizien Paxillus involutus. Le transport est de type actif et après élimination de la composante diffusive, il apparaît que la cinétique d'absorption est de type michaélienne. L'utilisation de protonophores et de différents inhibiteurs métaboliques révèle que le transport est de type symport proton dépendant. La représentation de Dixon de l'inhibition du transport de la méthylamine par l'ammonium montre que l'inhibition est de type compétitive. L'apport d'acides aminés dans le milieu de culture, ainsi que la carence en azote stimulent le transport de l'ammonium. La deuxième partie de ce travail a consisté à caractériser les gènes codant les transporteurs de l'ammonium chez le champignon Hebeloma cylindrosporum. Nous avons cloné et caractérisé trois transporteurs d'ammonium (AMT) possédant des propriétés cinétiques différentes. Le rôle de ces transporteurs est multiple puisque nous avons démontré leur rôle dans la rétention intracellulaire de l'ammonium ainsi que leur rôle de "sensing" dans le métabolisme azoté. La dernière partie de ce travail a consisté à étudier la régulation des gènes AMT1, AMT2, AMT3, GLNA et GDHA codant trois transporteurs d'ammonium ainsi que les enzymes d'assimilation (Gs, NADP-Gdh) respectivement. Nous avons démontré que la glutamine intracellulaire est un répresseur pour AMT1 et AMT2 et que l'ammonium intracellulaire est un répresseur pour GDHA. AMT3 et GLNA sont exprimés mais très peu régulés. L'ammonium intracellulaire réprime son transport.