Méthylation et expression du gène BRCA1 dans les gamètes et au cours de l'embryogenèse précoce humaine

• Auteur / Autrice : Sandrine Alby-Giscard d'Estaing
• Direction : Jean-François Guérin
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Médecine
• Date : Soutenance en 2002
• Etablissement(s) : Lyon 1

Mots clés

Mots clés contrôlés

Protéine BRCA1

Empreinte génomique

RT-PCR

Gamètes

Régulation génétique

Embryologie humaine

Méthylation

Résumé

La 4e de couverture indique : ''Le gène BRCA1 est un gène suppresseur de tumeur, impliqué dans les syndromes héréditaires des cancers du sein et de l'ovaire, et dans les cancers sporadiques. Ce gène code pour une protéine multifonctionnelle qui, en particulier, contribue activement au développement embryonnaire, à la gamétogenèse et au maintien de l'intégrité du génome. La méthylation est un mécanisme épigénétique majeur, impliqué dans la répression transcriptionnelle. Comme tous les gènes ubiquitaires, le gène BRCA1 possède un îlot de CpG dans sa région promotrice, son profil de méthylation est remarquable. En effet, une partie de cet îlot est constitutivement méthylé dans les cellules somatiques. Dans le génome eucaryote, ces îlots sont déméthylés sauf pour les gènes soumis à l'empreinte parentale et du chromosome X inactivé. Les remaniements du marquage épigénétique sont caractéristiques de la gamétogenèse et de l'embryogenèse. Notre objectif était d'étudier la cinétique de la méthylation de BRCA1 et de caractériser son expression dans les gamètes et les embryons humains préimplantatoires. Nous avons mis au point une méthode de séquençage génomique pour étudier le profil de méthylation de l'îlot de CpGs et des séquences codantes dans les gamètes et les embryons préimplantatoires. L'étude, en parallèle, du profil de méthylation des séquences codantes des gènes p53 et Brca1 murin a permis de vérifier la validité des résultats. Nous avons montré que l'îlot de CpGs est déméthylé dans les gamètes et les embryons. Les séquences codantes des trois gènes étudiés sont méthylés dans les gamètes puis sont soumises à une déméthylation progressive jusqu'au stade blastocyste. Afin d'étudier l'expression de BRCA1, nous avons développé une technique de RT-PCR compétitive quantitative dans les gamètes et les blastocystes et par une autre technique de RT-PCR, nous avons comparé le niveau d'expression des transcrits majoritaires (forme longue et épissée D11-BRCA1). Ces cellules surexpriment le gène BRCA1, mais nous n'avons pas montré de surexpression d'un transcrit par rapport à l'autre. La surexpression de BRCA1, dans les gamètes et les embryons, serait corrélée au profil déméthylé de l'îlot de CpGs et en relation avec sa participation active dans la gamétogenèse et l'embryogenèse précoce. Le déméthylation partielle des séquences codantes suggère une certaine héritabilité des marqueurs épigénétiques parentaux et contribuerait au maintien de la stabilité du génome. Ce travail ouvre de nouvelles perspectives sur l'importance de la méthylation au cours de l'embryogenèse précoce et il serait intéressant de voir si les phénomènes observés s'étendent à d'autres séquences. ''