Auteur / Autrice : | Laurent Delpy |
Direction : | Michel Cogné |
Type : | Thèse de doctorat |
Discipline(s) : | Biologie, sciences et santé |
Date : | Soutenance en 2002 |
Etablissement(s) : | Limoges |
Partenaire(s) de recherche : | autre partenaire : Université de Limoges. Faculté des sciences et techniques |
Mots clés
Mots clés contrôlés
Mots clés libres
Résumé
Dans le but d'étudier les mécanismes de régulation de l'ontogénèse B , nous avons consacré cette thèse aux perturbations générées par l'insertion d'un marqueur de sélection au sein du locus des chaînes lourdes d'immunoglobulines (locus IgH). En effet, plusieurs travaux de recombinaison homologue au sein du locus IgH ont montré que les effets engendrés par l'insertion du gène de résistance à la néomycine (néo) pouvaient s'avérer plus dramatique que ceux liés à la délétion d'éléments régulateurs. Afin de poursuivre ces études, nous avons réalisé l'insertion d'une "cassette néo" dans des cellules ES de souris en amont de l'activateur Emicrons situé entre le dernier segment JH et le gène Cmicrons. Chez les souris homozygotes (N/N), l'effet "néo" provoque un blocage au stade proB de la maturation cellulaire du à une compétition entre promoteurs induisant l'inhibition de la transcription du locus IgH en amont de l'insertion du gène néo. Malgrè l'absence de transcription, le locus reste accessible aux enzymes de recombinaison et présente des réarrangements V(D)J. Ces résultats confirment la possibilité d'un découplage entre les mécanismes de réarrangements et de transcription. Nous observons des jonctions VJk chez les souris N/N. Bien que les cellules pro-B issues de ces souris soient incapables d'exprimer de chaînes lourdes, l'analyse des transcrits matures de chaînes kappa révèle un faible taux de jonctions VJ induisant un décalage du cadre de lecture (33%). Ainsi, une surveillance des ARNm de chaînes légères kappa semble se produire et conduire à l'inhibition d'épissage ou à la dégradation des ARNm contenant des codons stop prématurés (NMD:"nonsense-mediated mRNA decay"). Nous avons montré que ce processus varie en fonction des segments Jk réarrangés et ne nécessite pas la présence d'un intron en 3' de la terminaison prématurée de la traduction.