Thèse soutenue

Transfert de fructosyls à partir de saccharose chez bacillus subtilis NCIMB 11871 et 11872 : caractérisation des enzymes impliquées

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Auteur / Autrice : Karine Wisselmann
Direction : Didier Combes
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Biologie, santé, biotechnologies. Microbiologie
Date : Soutenance en 2002
Etablissement(s) : Toulouse, INSA

Résumé

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Le travail présenté dans ce manuscrit de thèse concerne une fructosyl transférase produite par deux nouvelles souches de Bacillus subtilis. La fructosyl transférase est une enzyme catalysant le transfert d'un résidu fructose d'un donneur, en général le saccharose, sur un accepteur, par synthèse d'une liaison ß(2->1). Lorsque cet accepteur est une seconde molécule de saccharose ou l'un de ses homologues supérieurs, la réaction donne naissance aux fructooligosaccharides, sucres d'un grand intérêt industriel lié à leurs propriétés. Deux activités saccharolytiques ont été mises en évidence en plus de l'activité fructosyl transférase recherchée : une saccharose et une lévane saccharase. Afin de pouvoir étudier la fructosyl transférase seule, nous avons essayé de séparer les trois activités enzymatiques, tout d'abord en agissant sur leur apparition en cours de culture, puis en utilisant des techniques de séparation plus traditionnelles. Devant l'infructosité de ces essais, nous avons supposé que ces trois activités provenaient de la même enzyme, la lévane saccharase. La recherche du gène codant pour cette enzyme, son séquençage et sa délétion du génome des bactéries étudiées ont été nécessaires pour confirmer cette hypothèse.