Utilisation de la diffusion anomale de l'uranium pour déterminer la structure de macromolécules biologiques : des rayons X durs aux rayons X mous

The use of anomalous scattering of uranium for the determination of biological macromolecules structures : from hard to soft X-rays

• Auteur / Autrice : Marie-Laure Chesne
• Direction : Richard Kahn, Jean Vicat
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Physique
• Date : Soutenance en 2002
• Etablissement(s) : Université Joseph Fourier (Grenoble ; 1971-2015)

Résumé

Pour résoudre la structure de macromolécules biologiques, il faut déduire la phase des facteurs de structures à partir des intensités diffractées du cristal. Dans ce but, les méthodes SAD et MAD utilisent la variation du facteur de diffusion d'atomes lourds, fixés à la protéine, dans un de leur seuil d'absorption. Le phasage dépend de la population des sites de fixation et de la variation du facteur de diffusion au seuil choisi. Avec l'uranyle, on obtient souvent de nombreux sites, peu occupés. Nous avons utilisé de nouveaux complexes colorés d'uranyle, donnant de fortes occupations, pour résoudre de novo la structure du lysozyme et une structure inconnue. Nous avons exploré l'utilisation du seuil Mv de l'uranium ([lambda]=3,5A), où le facteur de diffusion varie de 120 électrons. Avec une atmosphère d'hélium limitant l'absorption, nous avons pu enregistrer trois jeux de données, sur une même image. Ces données ont été traitées à la fois avec des programmes ''classiques'' et plus spécifiques.