Cinetiques d'interaction antigene-anticorps : identification de facteurs qui influencent l'activite de liaison et ingenierie predictive

• Auteur / Autrice : Laurence Choulier
• Direction : Danièle Altschuh
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences médicales
• Date : Soutenance en 2001
• Etablissement(s) : Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008)

Résumé

Le travail presente dans cette these concerne l'etude des parametres capables d'influencer les cinetiques des interactions antigene-anticorps, et le developpement de methodes predictives de l'activite de liaison. La perspective de pouvoir moduler de facon predictive la liaison antigene-anticorps aurait des retombees importantes en biotechnologie et therapie. Les parametres cinetiques des interactions ont ete mesures par biacore. Nous avons montre l'influence de la presentation de l'antigene sur les cinetiques en comparant l'effet fonctionnel de substitutions identiques dans un antigene peptidique relativement flexible, et un antigene proteique plus rigide. D'autre part, nous avons defini les epitopes reconnus par deux fragments d'anticorps, par deux approches complementaires : synthese de peptides sur membrane de cellulose (spot) et phage display. L'un de ces epitopes est constitue de quatre residus essentiels a la liaison, et de positions accessoires dont la substitution affecte la dissociation de l'anticorps. Le deuxieme epitope est plus flou, car aucun residu ne semble essentiel a la liaison. La mutation de certains residus affecte aussi bien association que dissociation. L'approche qsar ( quantitative structure activity relationship ) a ensuite ete appliquee a l'un des deux systemes antigene-anticorps, afin de developper des modeles mathematiques reliant les parametres cinetiques de l'interaction a la sequence de l'epitope ou a la composition du tampon. Dans ce but, nous avons mesure les parametres cinetiques de l'interaction entre un fragment d'anticorps et 18 peptides dans 20 tampons differents. Cette approche semble prometteuse, puisque ces modeles ont ete utilises pour des predictions, validees dans la majorite