Etude de l'interaction des protéines reca d'Escherichia coli et xrad51. 1 de xenopus laevis avec l'ADN et les nucléotides atp et adp afin de comprendre le mécanisme d'activation de ces protéines par le cofacteur ATP dans le processus de la recombinaison homologue

• Auteur / Autrice : Tassadite Selmane
• Direction : Masayuki Takahasmi
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques fondamentales et appliquées
• Date : Soutenance en 2001
• Etablissement(s) : Paris 13

Mots clés

Mots clés contrôlés

Rec A Recombinases

Escherichia coli

Résumé

Les protéines reca et rad51, homologue eucaryotique, jouent un rôle crucial dans la conservation de l'intégrité du génome. Elles catalysent la recombinaison homologue. Reca intervient aussi dans le choix du processus de réparation de l'ADN alors que rad51 intervient dans la régulation de l'apoptose. Elles miment in vitro leurs fonctions en interagissant avec l'ADN et d'autres protéines et nécessitent de l'atp. Pour comprendre le mécanisme d'activation de reca par l'atp, j'ai examine l'effet de nucléotides sur l'interaction reca-ADN. Seuls les nucléotides triphosphates dont la base est une adénine stimulent l'interaction reca-ADN alors que les autres nucléotides, sauf utp, dissocient reca-ADN. D'après l'analyse de la structure cristallographique du complexe reca-adp, la base adénine de l'adp est proche du résidu tyr103 de reca. J'ai examine l'effet de remplacement de cette Tyr par d'autres acides amines aromatiques. Les protéines modifiées sont stimulées uniquement par les nucléotides ayant une adénine comme nucleobase, comme pour reca sauvage. Cependant, on observe une activation partielle par le nucléotide ctp de rad51 modifiée en tyr103 par un trp, alors qu'il inhibe l'activité de reca sauvage, confirmant l'importance de ce contact. J'ai aussi montre que le peptide l2 (résidus 195-209) de reca interagit avec l'ADN simple-brin de manière similaire a reca entière avec l'atp. Cette boucle est le centre catalytique de la réaction d'échange de brins d'ADN par reca et interagit avec l'ADN et l'atp. Ce résultat suggère que l'atp active reca via un changement de conformation de la boucle l2. Enfin, j'ai observé que rad51 de xenope interagit avec l'ADN de manière similaire à reca. J'ai examiné l'implication éventuelle de résidu