Caracterisation de proteases a serine et cinetique d'expression d'antigenes des stades invasifs de trichinella

• Auteur / Autrice : CATHERINE TRAP
• Direction : Pascal Boireau
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques fondamentales et appliquées
• Date : Soutenance en 2001
• Etablissement(s) : Paris 12

Résumé

Trichinella, agent etiologique de la trichinellose, est un nematode parasite a tres large spectre d'hotes et presentant une repartition cosmopolite. Il est parasite a l'etat adulte de l'intestin grele puis a l'etat larvaire des fibres musculaires striees. La maladie se transmet par ingestion de viande contenant des larves infestantes. Il existe trois stades antigeniques importants correspondant aux trois etapes principales de developpement du parasite, le stade l1 musculaire (l1m), le stade adulte et le stade l1 nouveau-nee (l1nn). Dans le but d'etablir un test de diagnostic precoce, plusieurs antigenes des stades precoces de trichinella ont ete identifies. Une cinetique d'expression d'antigenes a ete etablie a l'aide de surnageants de culture d'intestin de souris infestes par t. Spiralis et par pcr sur trois proteines p49, p53 et hsp70 dont l'immunodominance avait deja ete montree. Deux proteases a serine, pser et une kallikreine ont ete identifiees aux stades ad et l1nn de trichinella. Le gene de pser a ete isole apres criblage d'une banque du stade ad-l1nn de t. Spiralis avec une sonde d'adn de 610pb amplifiee par pcr a l'aide d'oligonucleotides degeneres specifiques de sequences conservees de proteases. La sequence proteique deduite de la sequence nucleique contient les trois acides amines (his, asp et ser) qui constituent la triade du site actif, signature des proteases a serine. Le gene est present en copie unique dans le genome de trichinella et appartient a une famille multigenique. Son expression constitutive montre que la proteine est necessaire durant tout le cycle de developpement de trichinella. Pser est localisee au niveau de la couche interne de la cuticule et de l'sophage. Cette localisation et la presence d'un peptide signal au sein de la protease suggerent que l'enzyme serait impliquee dans la nutrition du parasite.