Amelioration des vecteurs d'expression en vue de leur utilisation en transgenese animale. Application a la recherche d'isolateurs de genes

• Auteur / Autrice : SYLVIE RIVAL
• Direction : Louis-Marie Houdebine
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques fondamentales et appliquées
• Date : Soutenance en 2001
• Etablissement(s) : Paris 7

Résumé

Le but de ce travail a ete de rechercher un moyen de rendre l'expression des transgenes plus reproductible. Deux strategies ont ete mises en place. La premiere a ete de creer artificiellement une barriere aux bornes des transgenes en utilisant des sequences deja decrites comme isolateur de gene. La mar de l'extremite 5 du locus de la globine- humaine s'est averee peu efficace. La sequence repetee (ttccc) 4 6 susceptible de former une triple helice, quant a elle, inhibe l'expression du gene rapporteur non integre en fonction de son orientation par rapport au sens de transcription. Mais, son effet isolateur n'a pas pu etre mis en evidence. Enfin, l'element 5hs4 de la lcr du locus du gene de la globine- de poulet en amont d'un promoteur a expression ubiquiste dans cellules cho n'a aucun effet isolateur. A l'inverse, place en amont d'une region regulatrice ciblant l'expression dans la glande mammaire, l'element 5hs4 augmente le niveau d'expression, diminue l'extinction et ne modifie pas la specificite d'expression des transgenes dans des souris. Toutefois, il ne rend pas l'expression dependante du nombre de copies integrees. Son mode de fonctionnement dans les differentes lignees d'animaux transgeniques est encore inconnu. La deuxieme strategie a consiste a isoler le locus entier du gene wap de porc suppose contenir tous les elements necessaires pour une expression ciblee dans la glande mammaire d'animaux en lactation. Un fragment comprenant 140kb en amont et 5kb en aval de ce gene a ete isole a partir d'une banque d'adn genomique de porc. Il permet l'expression du transgene specifiquement dans la glande mammaire de toutes les souris transgeniques en lactation en fonction du nombre de copies integrees et a un niveau equivalent a celui du gene wap chez la truie lactante. Les prochaines etapes de ce travail consisteront a identifier les elements isolateurs du gene wap de porc et a les utiliser pour exprimer efficacement des genes etrangers.