Protection contre la leptospiose etude de deux genes d'interet : hap 1 and ompl1

• Auteur / Autrice : CHRISTINE BRANGER
• Direction : Geneviève André-Fontaine
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques fondamentales et appliquées. Sciences médicales
• Date : Soutenance en 2001
• Etablissement(s) : Nantes

Résumé

Les leptospires sont des bacteries du genre leptospira divise en plusieurs genomospecies dont certaines sont responsables d'une zoonose : la leptospirose. Des recherches anterieures ont permis l'obtention, apres purification, d'une fraction proteique de 32 kda associee a la protection contre cette maladie. Deux mini-sequences ont ete definies. L'analyse d'homologie de ces deux mini-sequences avec une banque de donnees a revele la presence de deux proteines dans la fraction 32 kda. L'existence de ces deux genes a ete confirmee par southern blot dont le profil de restriction concorde avec l'existence des genes hap 1 et ompl1 issus de la banque de donnees. L'analyse de la sequence des produits d'amplification a egalement permis de determiner la presence de ces deux genes hap 1 et ompl1 codant pour deux proteines conservees hap1 et ompl1. Les genes hap1 et ompl1 ont ete clones dans un vecteur procaryote et deux proteines recombinantes ont ete produites. La purification de ces proteines recombinantes a ete abordee par la strategie de chromatographie d'affinite (his-tag) permettant d'obtenir la proteine recombinante hap1 pure et en quantite suffisante pour des essais d'immunisation. Ces essais n'ont pas permis de montrer une protection significative induite par la proteine hap1, cependant l'anticorps monoclonal 6e5-a2f5 contre la proteine recombinante hap1 a apporte une protection passive significative contre une epreuve virulente. Les genes hap1 et ompl1 ont ete clones dans un vecteur eucaryote afin de realiser des essais d'immunisation a l'aide d'un adenovirus recombinant. Deux essais ont ete menes et ont donne des resultats concordants permettant de dire que hap1 apporte une protection contre une epreuve virulente heterologue de leptospires pathogenes. En revanche, ompl1 n'apporte aucune protection. La proteine hap1 est donc capable d'induire une protection contre la leptospirose. Elle devient un candidat interessant pour de potentiels nouveaux vaccins contre la leptospirose.