Étude virologique de la fixation et de la replication du virus de l'hépatite C sur des cellules permissives : analogie avec deux autres Flaviviridae, les virus de la dengue et de la fièvre jaune

• Auteur / Autrice : Raphaële Germi
• Direction : Emmanuel Drouet
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Biologie cellulaire et moléculaire
• Date : Soutenance en 2001
• Etablissement(s) : Université Joseph Fourier (Grenoble ; 1971-2015)

Mots clés

Mots clés contrôlés

Virus -- Reproduction (biologie)

Virus de l'hépatite C

Résumé

L'étude du cycle du virus de l'hépatite C ( VHC) et la découverte de nouveaux traitements antiviraux ont été entravés par l'absence de systèmes cellulaires permettant la multiplication efficace du virus. Ce constat a motivé la première partie de nos travaux. Nous avons évalué l'adsorption et la multiplication du VHC dans cinq lignées cellulaires. Les cellules Vero (rein de singe) et AP61 (moustique) ont permis la détection de l'ARN viral pendant 28 jours et la réalisation de 4 passages viraux successifs. Le système cellulaire Vero , associé à une technique originale de quantification des ARN viraux par RT-PCR en temps réel a permis l'étude de l'adsorption de CHC. Ce travail a révélé le rôle des glycosaminoglycanes cellulaires dans l'adsorption du VHC mais aussi de deux autres Flaviviridae, les virus de la dengue et de la fièvre jaune utilisés, en parallèle, comme modèle et étudiés à l'aide d'une techique de titrage viral en culture de cellules. Le rôle important du récepteur des lipoproéines de faible densité (LDL) dans l'adsorption du VHC a été confirmé (inhibition de la fixation virale par les LDL et des anticorps anti-recepteurs des LDL). Les techniques développées dans cette étude pourraient être utilisées pour le criblage de molécules inhibant l'adsorption cellulaire des Flaviviridae.

The study of Hepatitis C virus ( HCV) cycle and the discovery of new therapy have been hampered by the lack efficient virus culture systems. We assessed adsorption and replication of HCV on five cell lines. Monkey Vero cells and mosquito AP61 cells were selected for their ability to blind and replicate HCV and to support 4 virus passages. HCV adsorption was studies using Vero cells and quantification of virus RNA by a real time RT-PCR method. This work showed that cellular glycosaminoglycans were involved in HCV adsorption. These molecules were shown to have an important role in the binding of tow other Flaviviridea , Dengue virus and Yellow fever virus which were studies in parralel, as models, by virus titration in cell culture. The important role of low density lipoprotein (LDL) receptor in HCV adsporption was confirmed ( the viral binding was inhibited by LDL and anti-LDL receptor antibody). The methods descripted in this study might be screening of molecules inhibiting Flaviviridae cell-adsorption.