Analyse fonctionnelle des variations de la concentration en calcium libre dans le cytoplasme et le noyau des cellules de tabac en réponse à des éliciteurs des réactions de défense : identification de protéines kinases cibles
Auteur / Autrice : | David Lecourieux |
Direction : | Alain Pugin |
Type : | Thèse de doctorat |
Discipline(s) : | Biochimie. Biologie moléculaire et cellulaire |
Date : | Soutenance en 2001 |
Etablissement(s) : | Dijon |
Mots clés
Mots clés contrôlés
Résumé
Au cours de ce travail, nous avons étudié le rôle du Ca2+ dans le mode d'action de la cryptogéine, un éliciteur des réactions de défense chez le tabac. Des suspensions cellulaires de tabac exprimant l'aequorine ont été utilisées pour analyser les variations de la concentration cytosolique en Ca2+ libre ([Ca2+]cyt) en réponse à la cryptogéine ou à des éliciteurs oligosaccharidiques. La signature [Ca2+]cyt induite par la cryptogéine se caractérise par un premier pic transitoire de [Ca2+]cyt suivi d'une seconde élévation prolongée de [Ca2+]cyt vraisemblablement reliée à la dépolymérisation des microtubules et à l'activation de la mort cellulaire. Le peroxyde d'hydrogène produit suite à l'activation Ca2+-dépendante de la NADPH-oxydase de la membrane plasmique, participe aux variations de [Ca2+]cyt provoquées par la cryptogéine ou les OGs. Par ailleurs, l'utilisation de cellules de tabac exprimant l'aequorine dans le noyau nous a permis de montrer que la cryptogéine induit une élévation de [Ca2+]nuc intense, contrairement aux éliciteurs oligosaccharidiques. La recherche de cibles moléculaires du Ca2+ nous a permis d'identifier 3 protéines kinases (40, 60 et 72 kDa). L'activité des PKs de 60 et 72 kDa est Ca2+-dépendantes et se maintient pendant 2 h. La PK de 72 kDa pourrait correspondre à une protéine de tabac homologue de la CCaMK identifiée chez le mai͏̈s.