Thèse soutenue

Contrôle de l'activité protéolytique des protéases à cystéine de trypanosomes

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Auteur / Autrice : Fabien Lecaille
Direction : Gilles Lalmanach
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Sciences biologiques fondamentales et appliquées
Date : Soutenance en 2000
Etablissement(s) : Tours

Mots clés

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Mots clés contrôlés

Résumé

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Les protéases à cysteine (cps) trypanosomales sont essentielles dans la biologie du parasite ainsi que dans les mécanismes d'invasion des cellules de l'hôte. La congopaine de trypanosoma congolense (responsable de la nagana en Afrique) et la cruzipaine de t. Cruzi (responsable de la maladie de chagas en Amérique latine) sont par conséquent des cibles potentielles dans le développement de drogues antiparasitaires. Du fait d'une étroite similarité fonctionnelle et structurale avec les protéases de l'hôte, une connaissance détaillée de la spécificité enzymatique de ces deux protéases est un pré-requis pour le design d'inhibiteurs sélectifs. Comme leurs homologues de mammifères, les cps de trypanosomes sont synthétisées sous forme de zymogènes, et converties en formes actives âpres clivage et libération de la proregion dont le rôle est mal connu. Nous avons montré i) que leurs propeptides respectifs inhibent compétitivement et sélectivement leur forme mature et nous avons identifié ii) le motif yhnga, responsable de cette sélectivité. Ce mécanisme de régulation de l'activité enzymatique semble donc être extrêmement général pour les cps. D'autre part, nous avons étudié la spécificité de la poche s2 (déterminant majeur de la spécificité enzymatique des cps) de ces deux protéases au moyen d'analogues structuraux non-protéogeniques dérivés de phe, incorpores en position p2 dans des substrats fluorescents. L'analyse cinétique comparée avec les protéases de l'hôte (cathepsines b et l), nous a permis de sélectionner le résidu cha, relativement sélectif des cps de trypanosomes, comme un candidat de choix dans le développement d'une banque de pseudopeptides tetrameriques. Ce résidu a été incorporé dans la séquence cha-x1-x2-pro (x1 et x2 correspondent à différents analogues structuraux de phe). Suite au criblage de la banque, nous avons identifié un inhibiteur stable, compétitif et réversible vis a vis de la cruzipaine.