Mécanismes transcriptionnels de la surexpression du gène de la kératine 18 dans des cellules de carcinome du colon humain

Transcriptional Mechanisms Responsible for the Overexpression of the Keratin 18 Gene in Human Colon Carcinoma Cells

• Auteur / Autrice : Philippe Prochasson
• Direction : Olivier Brison
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Bases fondamentales de l'oncogenèse
• Date : Soutenance en 2000
• Etablissement(s) : Paris 11
• Partenaire(s) de recherche : Autre partenaire : Université de Paris-Sud. Faculté de médecine (Le Kremlin-Bicêtre, Val-de-Marne)
• Jury : Président / Présidente : Jean Feunteun
• Jury : Examinateurs / Examinatrices : Jean Feunteun, Michel Volovitch, Ahmet Civas, Geneviève Almouzni, Mathieu Gérard
• Jury : Rapporteur / Rapporteuse : Michel Volovitch, Ahmet Civas

Mots clés

Mots clés contrôlés

Facteurs de transcription CBP-p300

Acétylation

Kératine-18

Transcription génétique

Adénocarcinome

Cancer colorectal

Cancérogenèse

Mots clés libres

Indexation libre

Résumé

De nombreux gènes sont surexprimés dans les cellules tumorigènes de la lignée SW613-S (dérivée d'un adénocarcinome du colon humain) par rapport aux cellules non tumorigènes. Le gène de la kératine 18 (K18) a été choisi comme modèle pour étudier les mécanismes responsables de cette surexpression. Ce gène est également surexprimé dans 10 lignées de carcinome du colon humain sur 15 étudiées. Le promoteur minimal du gène K18 est responsable de la surexpression et le mécanisme en cause n'implique pas la fixation d'un facteur sur un site spécifique de l'ADN. Le traitement des cellules par des inhibite urs des déacétylases stimule l'activité du promoteur spécifiquement dans les cellules non turnorigènes, suggérant que le mécanisme implique un haut niveau d'acétylation des histones. La protéine ElA des adénovirus (inhibiteur des protéines p300/CBP) inhibe spécifiquement l'activité du promoteur K18 dans les cellules tumorigènes. Une surproduction de CBP est capable de reverser l'effet inhibiteur de ElA et de stimuler plus efficacement l’activité du promoteur dans les cellules non tumorigènes que dans les tumorigènes. Une surproduction du domaine CBP2 (domaine d'interaction avec ElA) inhibe spécifiquement l'activité du promoteur K18 dans les cellules tumorigènes. Le recrutement forcé sur le promoteur d'un fragment de la protéine CBP (domaine HAT et CBP2) stimule spécifiquement son activité dans les cellules non tumorigènes. Ces résultats montrent que p300/CBP sont impliquées dans le mécanisme responsable du haut niveau d'activité du promoteur K18. Les niveaux d'accumulation des ARNm et des protéines p300/CBP sont les mêmes dans les deux types cellulaires ainsi que leur activité HAT intrinsèque. Nous faisons l'hypothèse de l'existence d'un facteur cellulaire X qui interagirait avec p300/CBP et modulerait leur activité. X différerait entre les deux types cellulaires.

The mechanisms responsible for the overexpression of several genes in cells of tumorigenic clones of the SW613-S human colon carcinoma cell line, as compared to non-tumorigenic clones were studied. The keratin 18 (K18) was chosen as a model for this study. The overexpression of the K18 gene was observed in 10 colon carcinoma cell lines out of 15 studied. The minimal K18 promoter is responsible for the differential expression and the mechanism does not involve the binding of a factor to a specifie site on the DNA. Deacetylase inhibitor treatments of the cells abolished the differentiai activity of the promoter between the two cell types by specifically stimulating it in non-tumorigenic cells. Suggesting a difference at the leve!of histone acetylation. The adenovirus ElA protein (a known inhibitor of CBP/p300 proteins) specifically inhibited the activity of the Kl8 promoter in tumorigenic cells. An overexpression of CBP is able to reverse the ElA inhibitory effect and to stimulate more efficiently the activity of the K18 promoter in non-tumorigenic cells than in tumorigenic. An overexpression of the CBP2 domain (interaction domain of ElA) inhibits specifically the activity of the K18 promoter in tumorigenic cells. The direct recruitment of a fragment of the CBP protein (HAT and CBP2 domains) on the promoter stimulates specifically its activity in non-tumorigenic cells. Altogether these results indicate that the CBP/p300 proteins are involved in the mechanism responsible for the differential activity of the K18 promoter. No difference was found in the accumulation level of the CBP and the p300 mRNA and protein between the two cells types. CBP and p300 proteins immunoprecipitated from tumorigenic and non-tumorigenic cells displayed comparable HAT activities. This raises the possibility that a cellular X factor interacting with p300/CBP and modulating the HAT activity of these proteins may differ between the two cell types.