Controle de la transition g2/m chez arabidopsis thaliana : caracterisation d'un inhibiteur de kinases dependantes des cyclines analyse de la regulation de la transcription du gene codant la cycline mitotique arath ; cycb1 ; 1

• Auteur / Autrice : Séverine Planchais
• Direction : Catherine Bergounioux
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques fondamentales et appliquées
• Date : Soutenance en 2000
• Etablissement(s) : Paris 11

Résumé

La morphogenese des plantes superieures est liee a une regulation tres precise de deux processus coordonnes, la division cellulaire et l'elongation. Les kinases dependantes des cyclines (cdk) et leurs sous-unites regulatrices, appelees cyclines, jouent un role primordial dans la progression du cycle cellulaire. Les effets de la roscovitine, un compose inhibant selectivement certaines cdk chez les animaux, ont ete testes chez les plantes et plus particulierement dans la suspension cellulaire de tabac by-2. La roscovitine inhibe in vitro l'activite kinase de complexes cdk-cycline purifies a partir de cellules bloquees en g1 et en debut de mitose. De plus, la roscovitine induit l'arret des cellules de tabac by-2 aux transitions g1/s et g2/m. Ceci demontre qu'un complexe cdk actif est necessaire chez les plantes au passage des transitions g1/s et g2/m. Les cyclines de type b sont des proteines regulatrices du cycle cellulaire exprimees specifiquement en g2 et en mitose. L'etude du promoteur du gene codant la cycline mitotique d'arabidopsis thaliana arath; cycb1;1 a ete entreprise pour comprendre les mecanismes qui regulent cette transcription periodique. Des suspensions cellulaires de tabac by-2 ont ete transformees de maniere stable avec des genes chimeres consistant en des deletions successives en 5 du promoteur d'arath; cycb1;1 fusionnees avec le gene rapporteur gus codant la -glucuronidase. Apres une analyse de chaque souche synchronisee, il a ete demontre que 202 pb avant l'atg sont suffisantes pour induire une expression specifique en phases g2 et m. De plus, la region situee entre 202 et 108 pb avant l'atg est necessaire pour conferer une transcription g2/m specifique. Cette region contient une sequence de 18 pb avec un site de fixation des facteurs myb, aacgg. Cette sequence est capable d'activer la transcription d'un gene rapporteur quelle que soit son orientation et sans que l'expression soit specifique de la phase m. Des experiences de retard sur gel ont permis de montrer que des complexes proteiques d'arabidopsis se fixent specifiquement a cette sequence et que la sequence consensus myb est necessaire pour la fixation de ces complexes. Une purification des complexes par affinite proteine-adn a ete entreprise et leur identite a ete revelee par des analyses en spectrometrie de masse. Ceci nous a conduit a l'identification d'un facteur de transcription myb avec un domaine c-terminal acide et une proteine hypothetique qui a une leucine zipper et un domaine de dimerisation de type myc. Ces facteurs proteiques pourraient reguler la transcription du gene arath; cycb1;1 en activant son promoteur.