Etude des strategies evolutives des hemocyanines, proteines de transport de l'oxygene dans les invertegres

• Auteur / Autrice : ANNALAURA SABATUCCI
• Direction : Isabella Ascone
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques fondamentales et appliquées
• Date : Soutenance en 2000
• Etablissement(s) : Paris 11

Résumé

Ce travail porte sur l'etude de la structure des hemocyanines (hcs), proteines de transport de l'oxygene presentes dans certaines especes de mollusques et d'arthropodes. L'etude a ete menees deux niveaux structuraux, mettant en oeuvre deux methodes utilisant le rayonnement synchrotron x. 1) au niveau du site actif, a travers une analyse xas (x-ray absorption spectroscopy), une etude comparative du site de differentes hcs (4 hcs de mollusques et 4 d'arthropodes) a ete effectuee dans l'etat oxygene (oxy) et desoxygene (deoxy). Nos resultats montrent que le site est strictement conserve dans toutes les hcs dans la forme oxy. Les formes deoxy montrent des petites variations de geometrie du site entre les hcs d'arthropodes et des mollusque, qui ne sont pas detectables au niveau de la premiere sphere de coordination. Pour cette etude, nosu avons mis au point une nouvelle methode de preparation des echantillons qui a nous permis de disposer d'echantillons tres resistants aux degats d'irradiation x. 2) au niveau de la structure quaternaire, nous avons caracterise la conformation des hcs des cepahlopodes par diffusion des rayons x aux petites angles (saxs). Des modeles proposes sur la bases d'images de microscope electronique et d'autres resultats ont ete testes sur la molecule native de l'hc et o. Vulgaris. Une nouvelle metjhode de depolymerisation en presence d'ions zn + + en solution nous a permis de caracteriser des oligomeres des domaines fonctionnels de differentes tailles. Enfin, differentes produuits de dissociation primaire ont ete obtenus et caracterises. Nous avons montre que l'hc des cephalopodes peut adopter, une fois dissociee, deux etats conformationnels differents : un etat compacte a ph neutre et un etat plus ouvert a ph alcalin. Nous avons montre que les produits de dissociation de l'hc de o. Vulgaris song capables, dans certaines conditions, de se reassocier en un temps tres court selon le schema : forme ouverte > forme compacte > molecule native.