Transport et mise en place des proteines dans la paroi de corynebacterium glutamicum, une bacterie a gram-positif

• Auteur / Autrice : DUC-THANG NGUYEN
• Direction : Emanuel Shechter
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
• Date : Soutenance en 2000
• Etablissement(s) : Paris 11

Résumé

Au cours de cette these, nous avons realise l'etude in vivo du transport et de la mise en place des proteines ps1 et ps2 dans la paroi de la bacterie a gram positif corynebacterium glutamicum. Ps1, similaire au complexe antigenique 85 de mycobacterium, est impliquee dans la biosynthese de certains composants de la paroi. Ps2, qui s'ancre dans la paroi grace a son domaine hydrophobe c-terminal, forme un reseau cristallin qui recouvre la surface de la bacterie. Nous avons pu montrer que les etapes precoces du transport de ps1 et ps2, incluant leur maturation et leur translocation a travers la membrane cytoplasmique, sont rapides (t 1 / 2 d e m a t u r a t i o n = 30) et qu'elles necessitent l'atp et la force protomotrice (pmf). Les etapes plus tardives du transport plus sont lentes (t 1 / 2 d 'a p p a r i t i o n d a n s l a p a r o i = 3 a 4) et independantes de l'atp et de la pmf ; ces etapes correspondent probablement a leur diffusion dans la paroi jusqu'a leur destination finale. Par contre, en absence de son domaine hydrophobe c-terminal, ps2 est non seulement exclusivement localisee dans le milieu extracellulaire, mais l'ensemble d processus de secretion est rapide (t 1 / 2 d e s e c r e t i o n = 2) et necessite a la fois l'atp et la pmf. Ceci pourrait suggerer l'existence d'un systeme de transport specifique dans le cas de la forme secretee. Dans la seconde partie de nos travaux, nous avons caracterise les differents domaines de ps2 impliques dans l'ancrage a la surface bacterienne. D'une part, nous avons montre que la quantite de ps2 associee a la paroi diminue avec la longueur de la deletion dans le domaine c-terminal. D'autre part, la construction et l'analyse de proteines de fusion nous ont permis de montrer que le domaine d'ancrage de ps2 dans la paroi des corynebacteries est constitue des 200 derniers residus de la proteine. En particulier, un premier sous-domaine constitue des 52 derniers residus, incluant la sequence c-terminale hydrophobe, est strictement necessaire pour permettre l'ancrage mais n'est pas suffisante a elle seule pour assurer un ancrage optimal. La presence d'un second sous-domaine d'une vingtaine de residus centraux augmente significativement l'efficacite d'association a la paroi. L'ensemble de nos resultats suggere qu'il existe au sein de la proteine un mecanisme de cooperation entre ses differents sous-domaines pour assurer un ancrage efficace dans la paroi.