Etude de la regulation transcriptionnelle de deux genes : cftr et trh

• Auteur / Autrice : ISABELLE DIXMERAS DHERISSARD
• Direction : Jacques Elion
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques fondamentales et appliquées
• Date : Soutenance en 2000
• Etablissement(s) : Paris 7

Résumé

La connaissance et la comprehension des differents mecanismes de la regulation de l'expression des genes representent sur le plan fondamental et dans le cadre d'une recherche plus appliquee un des defis actuels de la biologie. Nous nous sommes interesses a la regulation au niveau transcriptionnel de deux genes, cftr et trh. Le gene cftr est principalement exprime au niveau des poumons, de l'intestin, du pancreas et des glandes sudoripares. Il est, lorsqu'il est mute, responsable de la mucoviscidose. Le gene de la trh est principalement exprime au niveau de l'hypothalamus et dans les cellules b du pancreas. Il pourrait etre implique dans la proliferation et/ou la differenciation de ces cellules. Une approche combinee de recherche d'empreintes phylogenetiques et de sites hypersensibles a l'adnase i avait permis de mettre en evidence un motif cre degenere sur une base potentiellement implique dans la regulation transcriptionnelle du gene cftr. Des experiences de transfections transitoires dans une lignee cellulaire immortalisee caco2 ont montre que le motif cre est implique dans l'expression basale du gene cftr mais que la regulation de l'expression du gene par l'amp cyclique impliquait d'autres elements que le motif cre. Nous avons montre qu'une region de 5,3 kb centree sur le premier exon et contenant des sites hypersensibles a l'adnase i specifiques de duodenum etait capable d'induire une expression dans des cellules de la crypte intestinales mais pas dans des fibroblastes. Cependant, cette region ne permet pas d'expression dans des souris trangeniques. Nous avons clone et sequence 6,5 kb de sequence promotrice du gene trh de rat. Ces sequences ont ete clonees en amont d'un gene rapporteur beta galactosidase afin de realiser des experiences de transfection transitoire dans des cellules en lignee ou dans des cultures primaires d'ilots ftaux de rat. Les experiences realisees jusqu'a present n'ont pas permis de mettre en evidence d'expression specifique du transgene. Nous allons ensuite realiser des souris transgeneniques. Des souris transgeniques sont en cours de realisation afin d'etudier l'expression du transgene in vivo. Les avantages et les limites des differentes approches de l'etude de la regulation transcriptionnelle des genes sont discutes a l'aide de ces deux exemples.