NOP 52, une nouvelle protéine impliquée dans la maturation de l'ARNR : séquence, localisation, recrutement en fin de mitose de nucléole

par Tulia Maria Savino

Thèse de doctorat en Sciences biologiques fondamentales et appliquées

Sous la direction de Danièle Hernandez-Verdun.

Soutenue en 2000

à Paris 5 .

mots clés

• Ribosomes
• Protéines nucléaires

Résumé

La biogenese des ribosomes met en jeu des machineries recrutees au niveau des genes ribosomiques en fin de mitose. Ces machineries sont peu connues chez les mammiferes. Dans cette etude, nous avons identifie une nouvelle proteine nucleolaire humaine, nop52. Nous avons clone nop52 par criblage d'une banque d'expression. La sequence de nop52 montre qu'elle est conservee et homologue d'une proteine de levure, rrp1 (rrna processing protein 1), impliquee dans l'exclusion de l'its2 de l'arnr. Nop52 se localise dans le composant granulaire du nucleole pendant l'interphase, a la peripherie des chromosomes pendant la mitose et dans les pnb (pre nucleolar body) a la transition telophase/g1. Nous demontrons que les proteines impliquees dans la maturation des arnr forment differents pnb selon qu'elles participent aux etapes precoces ou tardives. Nous avons etabli qu'il existe un ordre de recrutement de ces proteines dans le nucleole et nous proposons que leur cinetique d'adressage est en rapport avec leur fonction. Nous avons suivi par microscopie 4-d dans des cellules vivantes, la formation des pnb et l'assemblage du nucleole. Nos donnees montrent que : les pnb se forment a la peripherie des chromosomes et restent attaches a la chromatine condensee. La fibrillarine et nop52, presentent une cinetique differente d'adressage vers le nor. Cet adressage se fait par des flux a partir des pnb et non par fusion des pnb avec le nucleole comme il etait communement admis. Les pnb contenant la fibrillarine ont une duree de vie plus courte que ceux contenant nop52. Nous proposons que l'assemblage et le desassemblage des pnb controlent le recrutement des proteines dans le nucleole, et nous suggerons que les pnb sont des sites de retention dependants de la presence de pre-arnr. Enfin, nous avons observe le regroupement des territoires chromosomiques differents dans un seul domaine nucleolaire. Cette etude permet de mieux comprendre l'assemblage d'un domaine fonctionnel du noyau : le nucleole.

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