Mise en évidence et étude de la cytotoxicité de Pseudomonas Æruginosa envers les polynucléaires neutrophiles humains

• Auteur / Autrice : Denis Dacheux
• Direction : Bertrand Toussaint
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques
• Date : Soutenance en 2000
• Etablissement(s) : Université Joseph Fourier (Grenoble ; 1971-2015)

Mots clés

Mots clés libres

Microbiologie

Pseudomonas aeruginosa

Homme

Neutrophile

Pouvoir pathogene

Cytotoxicite

Mort cellulaire

Oncolyse

Systeme transport

Proteine transport

In vitro

Lignee cellulaire

Proteine exo

Systeme secretion type iii

Résumé

Pseudomonas aeruginosa est un pathogene opportuniste responsable d'infections chroniques chez les patients atteints de mucoviscidose. Dans ce contexte les polymorphonucleaires neutrophiles (pmns) semblent incapables d'eliminer les bacteries. Nous avons etudie l'interaction entre une souche de p. Aeruginosa d'origine mucoviscidique, la souche cha, et les pmns humains a l'aide d'un modele in vitro d'infection cellulaire. La souche cha est capable d'echapper a l'action bactericide des pmns et d'induire leur mort rapide. La construction d'un mutant deficient dans le systeme de secretion de type iii perd sa capacite a induire la mort des pmns. La secretion de type iii est un systeme de virulence permettant a la bacterie de transloquer directement dans le cytosol des cellules cibles des effecteurs cytotoxiques. Chez p. Aeruginosa ces effecteurs sont au nombre de quatre : exos, t, y et u. Seule l'exoenzymeu, est connue pour avoir une activite lytique sur les cellules. L'absence du gene exou du genome de la souche cha montre que cette cytotoxicite sur les pmns est dependante de la secretion de type iii et exou-independante. Cette souche est capable d'induire une cytotoxicite egalement rapide sur les macrophages et plus lente sur les lymphocytes b et les lignees epitheliales. La mort cellulaire induite est oncotique (perte de l'integrite membranaire) et non apoptotique. Cette oncose est due a la formation de pores membranaires, demontree par des experiences d'osmoprotection et de marquage cellulaire. L'analyse d'isolats cliniques mucoviscidiques a montre que 21% des isolats sont capables d'induire une telle cytotoxicite type iii dependante et exou independante. La plupart des souches non cytotoxiques n'exprime pas le systeme de secretion de type iii dans des conditions d'induction. Une banque de 5000 mutants de transposition de la souche cha a ete realisee. Le criblage de cette banque pour la perte du phenotype cytotoxique a permis d'isoler 48 mutants non cytotoxiques. Le clonage et le sequencage des genes mutes nous ont permis d'identifier 38 genes differents. Ces genes peuvent etre regroupes en trois categories : ceux impliques dans l'adhesion aux pmns, ceux necessaires au systeme de secretion de type iii et les candidats potentiels pour des effecteurs cytotoxiques.