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Thèse soutenue

Intérêt de l'électrochimie et des organométalliques pour la détection de fragments d'ADN amplifiés : application à la détermination du cytomégalovirus humain

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Auteur / Autrice : Fatima Azek
Direction : Pierre Brossier
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Microbiologie médicale et moléculaire
Date : Soutenance en 2001
Etablissement(s) : Dijon

Résumé

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Notre objectif a été d'envisager l'utilisation de capteurs életrochimiques pour la détection de produits amplifiés. L'évaluation d'un test d'hybridation utilisant des micro-électrodes de carbone sérigraphiées jetables a été appliqué à la détection du cytomégalovirus humin (HCMV) en comparaison avec une révélation colorimétrique. La,première partie de ce mémoire est consacrée à des généralités sur le HCMV et sur les méthodes de détection d'ADN amplifié. La seconde partie décrit le travail effectué. Le premier chapitre est dédié à une étude sur les électrodes sérigraphiées recouvertes de Nafion (R), polymère capabale d'accumuler sélectivement des espèces cationiques. Le test d'hybridation est réalisé dans les puits d'une plaque de microtitration. Le marqueur phosphatase alcaline est associé à un substrat organométallique dérivé du cobaltocène et l'électrode sert uniquement de capteur. La comparaison des résultats obtenusen voltammétrie cyclique avec ceux enregistrés par le etst colorimétrique permet de mettre en évidence les adaptations nécessaires pour évoluer vers une détection électrochimique sensible, en particulier le confinement du signal au niveau de l'électrode. D'où les travaux exposés dans le chapitre suivant consacré à la fixation directe de l'ADN sur des élctrodes de carbone nues. L'optimisation des conditions de fixation et d'hybridation et l'utilisation du couple peroxydase-ortho-phényllènediamine permettent la détection d'un signal électrochimique corrélé à la présence d'ADN du HCMV. . .