Recherche Avancée

Thèse soutenue

Étude de l'activité anti-salmonella enteritidis de deux souches d'Escherichia coli : purification et caractérisation de deux microcines

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Auteur / Autrice : Sandrine Gaillard-Gendron
Direction : Anne-Marie Pons
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Microbiologie
Date : Soutenance en 2000
Etablissement(s) : Brest

Résumé

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Quatre souches d'Escherichia coli - j03, j04, j05 et lLR05 - ont été isolées à partir d'intestins de volailles en raison de leur capacité à produire une microcine active contre salmonella enteritidis. Les microcines sont des peptides antibactériens qui se caractérisent par leur faible masse moléculaire et leur spectre d'activité étroit. Leur synthèse n'est pas létale pour la souche productrice et elle n'est pas inductible par les agents déclenchant le système SOS. Les microcines sont préférentiellement produites lorsque les conditions nutritionnelles de culture sont pauvres. Les souches j03, j04 et j05 d'E. Coli produisent la même microcine. Il s'agit de la microcine j25. Cette microcine, sensible a la pronase en raison de sa nature protéique, résiste néanmoins a un grand nombre de protéases. D'autre part, son activité est inchangée à des pH éloignés de la neutralité de même qu'après un chauffage de 15 minutes à 121\c. La mccj25 à une masse moléculaire de 2105,9 da et elle se compose de 21 acides amines dont 43% sont hydrophobes. La souche E. Coli LR05 possède quant à elle un phénotype original. Elle co-produit la MccJ25 avec une microcine thermosensible a 121\c et dont l'activité anti-E. Coli MccJ2 5 + disparaît à des pH supérieurs a 11,5 ou en présence de trypsine, papaïne ou pepsine. Cette microcine a été purifiée selon un protocole qui s'articule en trois étapes : une extraction sur phase solide c18, une CLHP en phase inverse c18 et une CLHP echangeuse de cations. La microcine purifiée a ete soumise à des analyses de spectrométrie de masse, de composition en acides amines et de séquençage par dégradation d'Edman. Sa masse moléculaire est de 8899,58 Da. Sa composition en acides aminés compte une forte proportion de résidus hydrophobes (41%) mais seulement cinq résidus basiques. Le séquençage de ses 40 premiers acides amines n terminaux nous a montré qu'il s'agissait d'une nouvelle microcine que nous avons appelée MccL. La comparaison de cette séquence n terminale avec des séquences protéiques de la banque embl révèle que la mccl présente des homologies avec la lactacine f et la gassericine à qui sont des bactériocines de classe II produites par des bactéries à gram positif. La MccL a un spectre d'activité étroit ; elle est inactive vis-à-vis de salmonella enteritidis mais elle inhibe le développement de certaines souches d'Escherichia coli enteropathogènes.