Synthese d'analogues c-5 branches de la thymidine et incorporation dans des oligodesoxynucleotides

• Auteur / Autrice : VALERIE BANULS
• Direction : Liliane Gorrichon
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
• Date : Soutenance en 1999
• Etablissement(s) : Toulouse 3

Résumé

Dans l'optique de preparer des oligonucleotides synthetiques comme agent antisens, nous avons synthetises des nucleosides fonctionnalises en c-5 du sucre par des chaines alkyles de differentes longueurs porteuses d'un groupement electrophile, pour developper un nouvel outil de conjugaison des oligodesoxynucleotides sur support solide. Les interets d'un groupement electrophile sont d'une part la possibilite de greffer une plus grande variete de ligands et d'autre part d'effectuer le greffage avant que l'oligodesoxynucleotide ne soit clive du support. Nous avons synthetise des analogues c-5 branches de la thymidine par introduction d'une chaine alkyle de deux, trois ou cinq atomes de carbone. La synthese de la 5-c-hydroxyethyl-thymidine a ete realisee par condensation de mukaiyama entre le derive aldehyde de la thymidine et un enolate silyle. Les syntheses des nucleosides fonctionnalises par une chaine propyle ou pentenyle ont ete realisees par condensation de type sakurai entre l'aldehyde de la thymidine et des allyltrimethylsilanes. Ces syntheses sont diastereoselectives et se font avec de bons rendements. La configuration absolue du centre asymetrique cree en 5 a ete definie pour chaque analogue. Un dimere modele a ete prepare avec chacun des nucleosides c-5 branches. Des experiences de conjugaison avec differentes amines ont ete menees sur ces dimeres. Dans le cas du dimere forme avec la 5-c-tosyloxyethyl-thymidine, la formation d'un phosphotriester cyclique diastereoisomeriquement pur a ete observee. Ce produit dimerique introduit donc une nouvelle famille de liens internucleotidiques neutres. Le phosphoramidite du dimere phosphotriester cyclique a ete incorpore une a deux fois dans un oligodesoxynucleotide. Le compose 5-c-(bromo-1-pent-3-ene)-thymidine a ete derive en phosphoramidite correspondant et incorpore une a deux fois dans des oligodesoxynucleotides. Apres couplage avec du texas red (fluorophore), les oligodesoxynucleotides conjugues ont ete utilises avec succes lors d'experiences de sequencage d'adn. L'adjonction d'une chaine -bromo-pentenyle en position c-5 s'est averee etre un bon outil pour assurer la conjugaison des oligonucleotides.