Synthese d'oligonucleotides modifies par des polyamines et leur utilisation dans la stabilisation des structures en double helice de l'adn

• Auteur / Autrice : Pierre Potier
• Direction : Jean-Paul Behr
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Psychologie
• Date : Soutenance en 1999
• Etablissement(s) : Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008)

Résumé

Il est possible d'envisager le controle de l'expression des genes en interagissant avec l'arnm (strategie antisense) ou directement avec l'adn chromosomique (strategie antigene). Ainsi, l'invasion d'un double brin d'adn par des oligonucleotides (odns) permettrait la reconnaissance specifique d'un gene. Cependant, l'ouverture de la double helice necessite une hybridation forte entre l'odn et l'un des deux brins. Ce travail de these a donc consiste a etudier la stabilisation des structures duplexes de l'adn, par la conjugaison de spermines a des oligonucleotides. L'attachement de la polyamine a la position c2 des purines a permis d'obtenir de fortes stabilisations contre la denaturation thermique. Afin d'obtenir de tels odns modifies, nous avons du prealablement optimiser la reaction de fluoration permettant d'obtenir l'intermediaire cle de la synthese : la 2-fluoro-2-desoxyinosine. Nous avons decrit la synthese du phosphoramidite d'une guanosine conjuguee a la spermine et son introduction dans de nombreux oligonucleotides modifies (odn-sper). La modification des odn-sper a permis d'ameliorer les proprietes d'invasion de la double helice par rapport a des odns non-modifies. Il a notamment ete possible de mettre en evidence un meilleur amorcage de polymerisation des odn-sper dans un protocole de sequencage de fragments d'adn.