L'induction de fonctions de biotransformation hepatiques par le phenobarbital : etude genetique et moleculaire chez la souris

• Auteur / Autrice : NATHALIE MAEVA MARC
• Direction : Laurent Corcos
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Biologie
• Date : Soutenance en 1999
• Etablissement(s) : Rennes 1

Résumé

L'expression des genes codant les enzymes de detoxication peut etre modifiee par certains xenobiotiques, notamment le phenobarbital (pb). Le pb induit dans le foie de mammifere l'expression de nombreux genes dont ceux codant les cytochromes p450 (cyps) des familles 2b, 2a, 2c, 3a, 1a et la forme cytosolique de l'aldehyde deshydrogenase (ald-2). L'objectif de notre travail etait de caracteriser des entites moleculaires impliquees dans ce mecanisme, et ce en developpant deux approches complementaires, l'une genetique et l'autre moleculaire. L'analyse genetique de l'inductibilite de l'ald-2 par le pb au sein d'une population murine obtenue par un croisement en retour (b6d2f1d2) nous a permis de confirmer l'implication d'un gene regulateur majeur dans ce mecanisme. En recherchant une liaison genetique entre ce locus et un marqueur de type microsatellite, nous avons pu distinguer une region sur le chromosome 7 susceptible de porter ce gene. En utilisant des souris dont le gene du recepteur ah (ahr) a ete invalide (ahr-/-), nous avons montre que l'induction du cyp la2 par le pb ne necessite pas un ahr fonctionnel, et qu'une proteine presentant une parente immunologique avec le ahr pourrait se lier au dre (dioxin responsive element) en reponse au pb. On trouve dans la sous-famille 2b les genes dont l'expression est la plus fortement affectee par le pb. Le criblage d'une banque d'adnc murins avec une sonde cyp2b1 de rat nous a permis d'identifier deux sequences originales, l'une tres proche de celle du cyp2b10 (98% d'homologie) presentant 34 divergences ponctuelles dispersees le long de la sequence, l'autre etant derivee d'un pseudogene. Les processus de phosphorylation/dephosphorylation semblent tenir un role determinant dans le mecanisme d'action du pb. Nos resultats suggerent un role positif de la voie ca 2 +/camk et une contribution negative de la voie ampc/pka dans le mecanisme d'action du pb sur les cyp2b10 et cyp3a dans des hepatocytes murins en culture primaire.