Expression des différents promoteurs du gène de la Gamma glutamyl transpeptidase (GGT) dans le foie de rat au cours du développement et de la régénération

• Auteur / Autrice : Nathalie Holic
• Direction : Yannick Laperche
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Médecine. Endocrinologie et intéractions cellulaires
• Date : Soutenance en 1999
• Etablissement(s) : Paris 11
• Jury : Président / Présidente : Claude Forest
• Jury : Examinateurs / Examinatrices : Claude Forest, Dominique Bernuau, Mary C. Weiss, Michelle Hadchouel, Yannick Laperche
• Jury : Rapporteurs / Rapporteuses : Dominique Bernuau, Mary C. Weiss

Mots clés

Mots clés contrôlés

Cellules cultivées

Hépatocytes

Différenciation cellulaire

Marqueurs génétiques

Gamma-glutamyl-transférase

Mots clés libres

Gène, expression

Promoteur

Résumé

La gamma-glutamyl transpeptidase (GGT) est une enzyme membranaire qui contribue au maintien du taux intracellulaire du glutathion dans de nombreuses cellules épithéliales. Dans le foie adulte, 1'activité de la GGT est associée aux cellules biliaires. L'apparition de cette activité dans les hépatocytes dans des conditions de stress oxydatif, dans les foyers prénéoplasiques et dans les tumeurs induites par les génotoxiques a remis en cause l'utilisation de la GGT comme marqueur biliaire. Chez le rat, le gène de la GGT présente une organisation transcriptionnelle complexe ; sept ARNm qui codent pour la même protéine sont transcrits à partir de cinq promoteurs différents. Le but de mon travail a été l'étude de l'expression des différents promoteurs du gène de la GGT lors de la différenciation des cellules précurseurs hépatiques dans les voies biliaire et hépatocytaire en utilisant des modèles in vivo et in vitro chez le rat. J'ai montré par RT-PCR quantitative et hybridation in situ que la transcription de ce gène se faisait à partir de promoteurs différents selon le stade de différenciation des cellules hépatiques. L'expression du promoteur P5 apparaît comme une caractéristique des cellules précurseurs hépatiques. L'expression se fait à partir du promoteur P4 dans les cellules biliaires et du promoteur P3 dans les hépatocytes immatures. L'analyse de l'expression des promoteurs du gène de la GGT permet donc de suivre la différenciation des cellules précurseurs hépatiques dans les deux lignages.

Gamma-glutamyl transpeptidase (GGT) is a membrane-bound enzyme, which contributes to maintain intracellular glutathion level in epithelial cells. In adult liver, the GGT activity is associated to biliary cells. However, the induction of GGT activity in preneoplasic foci and in hepatocytes following xenobiotic treatments has questionned the use of GGT activity as a biliary marker. In the rat, the single copy GGT gene is transcribed from five promoters (Pl to P5) into seven mRNAs differing only in their 5'-untranslated regions and coding for a single protein. The aim of the present work was to study the expression pattern of GGT promoters during differentiation of rat hepatic precursor cells into hepatocytes or biliary cells, in vivo and in vitro. I evidenced, using quantitative RT-PCR and in situ hybridization, that GGT gene transcription occurs from multiple promoters in liver cells depending upon their differentiation stage. Expression from the promoter P5 appears to be a characteristic of hepatic precursor cells before their commitment into hepatocytic or biliary lineage. Promoter P4 and P3 expression can be associated to biliary cells and to immature hepatocytes, respectively. In conclusion, GGT gene expression pattern is differentially altered along with differentiation of hepatic precursor cells into both hepatic lineages.