L'arn polymerase iii chez s. Cerevisiae : formation du complexe de pre-initiation et organisation du site actif

• Auteur / Autrice : SOPHIE ROZENFELD
• Direction : Pierre Thuriaux
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
• Date : Soutenance en 1999
• Etablissement(s) : Paris 11

Résumé

Chez les eucaryotes, la transcription specifique des genes d'arnt par l'arn polymerase iii requiert deux facteurs generaux de transcription, tfiiic qui se fixe sur les sequences promotrices, et tfiiib qui fixe le complexe tfiiic_adn et recrute l'enzyme. La composition sous-unitaire du facteur tfiiic est aujourd'hui determinee. Un mutant thermosensible dans la plus grande sous-unite de tfiiic, tfc3-g349e, dont les proprietes de liaison au promoteur des genes d'arnt sont alterees in vitro, a permis la recherche aleatoire de mutations a effet suppresseur. Deux mutations dans tfc3 ont ete isolees dans une region differente de la mutation initiale tfc3-g349e. Une mutation dans la phase ouverte de lecture ydr362c a contribue a identifier celle-ci comme tfc6 codant la sous-unite 91. Ce suppresseur dans tfc6 est egalement capable de corriger in vitro le defaut de liaison de tfiiic sur l'adn. Ceci montre que 91 coopere avec 138 pour la fonction de liaison de tfiiic au promoteur. Cinq suppresseurs dans tfc4, codant la sous-unite 131 responsable du recrutement de tfiiib, ont ete isoles. L'un d'entre eux, tfc4-h190y, egalement isole comme suppresseur d'un mutant de la sequence promotrice, ameliore l'efficacite de recrutement de tfiiib. Les quatre autres mutants suppriment probablement selon un mecanisme similaire. Les deux grandes sous-unites de toutes les arn polymerases eucaryotes sont homologues a et de l'enzyme bacterienne, et ont en commun des domaines fortement homologues. Par la recherche de mutations suppresseurs a partir du mutant thermosensible rpc160-112 altere dans l'elongation in vitro, nous avons montre une cooperation entre les trois domaines les plus conserves des deux plus grandes sous-unites, c160-d et c160-f et c128-h de l'arn polymerase iii de s. Cerevisiae. La caracterisation biochimique de l'un des suppresseurs a montre que le domaine f est implique dans l'activite ribonucleasique intrinseque de l'enzyme, et dans le processus de terminaison.