Approches immunologiques du recepteur nk1 et de son ligand endogene la substance p : caracterisation d'un peptide bioactif a partir de la structure d'un anticorps monoclonal

• Auteur / Autrice : MARIE-ASTRID SAGOT
• Direction : Jean-Yves Couraud
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
• Date : Soutenance en 1999
• Etablissement(s) : Paris 11

Résumé

Il a ete montre que des anticorps images internes de ligands endogenes pouvaient etre utilises pour developper des peptides a activite pharmacologique. C'est pourquoi nous avons utilise l'anticorps monoclonal mab12 dirige contre le site de liaison du neuropeptide substance p (sp) sur son recepteur (nk1). Le clonage et le sequencage de l'anticorps mab12 ont mis en evidence une similitude entre le profil d'hydropathie de la sp et celui de la seconde region hypervariable de la chaine legere (cdr2l). Un peptide synthetique correspondant a cette region est capable de bloquer la liaison de la sp sur le recepteur nk1 et se comporte comme un antagoniste de la sp. Le clonage et le sequencage de l'anticorps mab12 ont egalement revele que les profils d'hydropathie de plusieurs cdrs etaient parfaitement opposes a celui du peptide ps contre lequel l'anticorps avait ete produit. En utilisant la technique des biosenseurs, nous avons demontre l'importance de cette complementarite d'hydropathie entre paratope et epitope dans la liaison anticorps-antigene et propose un modele ou l'hydropathie interviendrait dans les premieres etapes de l'interaction. Nous avons determine sur le recepteur nk1 differentes regions dont le profil d'hydropathie est oppose a celui des ligands endogenes sp et neurokinine a (nka) et avons emis l'hypothese que ces regions pouvaient constituer des sites de liaison potentiels. Des mutations ponctuelles d'une de ces regions abolissent la liaison et l'effet pharmacologique de la nka sans affecter ceux de la sp. Nous avons suppose qu'il existait sur le recepteur nk1, deux sites de liaison distincts pour les differentes tachykinines. Enfin, dans le but d'obtenir de nouveaux anticorps diriges contre le recepteur nk1, nous avons teste la nouvelle methode d'immunisation genique. Les resultats preliminaires suggerent que cette methodologie permet la production d'anticorps susceptibles de reconnaitre ce recepteur sous sa forme native et denaturee.