Mise en place d'un domaine fonctionnel du noyau : le nucleole. etude in vivo et in vitro au cours du developpement de xenopus laevis

par CELINE VERHEGGEW SOURGENS

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Danièle Hernandez-Verdun.

Soutenue en 1999

à Paris 11 .

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Résumé

La mise en place du nucleole a ete etudiee au cours du developpement de xenopus laevis. Dans ce systeme, les fonctions nucleaires sont mises en place progressivement (d'abord des cycles de replication sans transcription puis activation progressive des differentes transcriptions). Nous avons montre que : 1 - les machineries de maturation et une partie des machineries de transcription des arn ribosomiques (arnr) s'organisent dans un domaine nucleolaire avant l'activation de la transcription des genes ribosomiques ; 2 - des arnr synthetises pendant l'ovogenese sont maintenus pendant le developpement precoce de l'embryon et readresses au nucleole en meme temps que les machineries de maturation ; 3 - ce readressage a lieu en presence d'une faible dose d'actinomycine d qui bloque la transcription dependante de l'arn pol i mais n'a pas lieu avec une plus forte dose d'actinomycine d qui bloque les transcriptions dependantes des arn pol ii et iii. On constate que le recrutement des machineries de maturation des arnr ne se fait que en presence de transcrits non matures et que l'arn polymerase i n'est pas requise puisqu'elle est adressee plus tard au domaine nucleolaire. La distribution des machineries nucleolaires a aussi ete etudiee dans des noyaux reconstitues in vitro. Des noyaux de spermatozoides et d'erythrocytes de xenope ont ete permeabilises et incubes dans un extrait d'oeufs de xenope. La replication et le transport sont reactives dans ces conditions mais pas la transcription. Dans ces noyaux, une grande quantite de proteines nucleolaires d'origine maternelle est importee et s'assemble en corps prenucleolaires disperses dans le nucleoplasme. Cette situation in vitro rejoint ce que nous avons observe in vivo dans les noyaux embryonnaires avant que la transcription ne soit activee.

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