Etude fonctionnelle de la proteine abc10, sous-unite commune aux trois arn polymerases de la levure saccharomyces cerevisiae

• Auteur / Autrice : LIUDMILLA RUBBI
• Direction : Pierre Thuriaux
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
• Date : Soutenance en 1999
• Etablissement(s) : Paris 11

Résumé

Chez saccharomyces cerevisiae, les trois arn polymerases, (i, ii et iii), sont constituees chacune de deux grandes sous-unites, homologues aux sous-unites ' et de l'enzyme bacterienne, associees a de plus petits polypeptides. Parmi ceux-ci, cinq abc27, abc23, abc14. 5, abc10 et abc10, sont communs aux trois formes d'enzyme et sont strictement indispensables a la viabilite cellulaire. Ce travail porte sur l'etude fonctionnelle de l'une de ces sous-unites communes, la proteine abc10. Tous les homologues eucaryotiques d'abc10 ainsi qu'un homologue archebacterien putatif, possedent deux regions conservees : un motif de liaison au zinc et une region c-terminale riche en acides amines basiques. Par une analyse mutationnelle, nous avons isole plusieurs mutants conditionnels qui nous ont permis de montrer l'importance de ces deux regions. Parmi ces mutants, deux ont ete retenus afin d'etudier in vivo leur activite transcriptionnelle. L'un d'entre eux, possedant des substitutions dans la region c-terminale, presente un defaut plus specifique dans la synthese des transcrits de l'arn polymerase iii. L'analyse biochimique de ce mutant a montre que cette forme mutagenisee d'abc10 entraine un defaut dans l'assemblage de l'enzyme sans affecter sa stabilite ou son activite catalytique. L'etude genetique des mutants conditionnels par suppression extragenique et par la methode du double-hybride a revele que la deuxieme plus grande sous-unite de chaque arn polymerase est le principal partenaire proteique d'abc10 au sein des trois enzymes. L'interaction d'abc10 avec ces sous-unites pourrait representer l'etape limitante dans le processus d'assemblage des arn polymerases puisque nous avons observe que abc10 est la seule sous-unite pour laquelle le dosage du gene limite le taux de croissance cellulaire.