Identification de genes d'adn-methyltransferase chez ascobolus immersus et effets de leur inactivation sur le mip, le developpement et la stabilite du genome

• Auteur / Autrice : Fabienne Malagnac
• Direction : GODELEINE FAUGERON
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
• Date : Soutenance en 1999
• Etablissement(s) : Paris 11

Résumé

Chez le champignon ascobolus immersus, les sequences d'adn repetees sont les cibles, au cours de la reproduction sexuee, du processus de methylation induite premeiotiquement (mip). Le mip conduit a la methylation de novo des cytosines des sequences repetees. Lorsque les sequences ayant subi le mip contiennent des genes, ceux-ci sont inactives car la methylation affecte leur transcription. La methylation et l'inactivation resultant du mip sont maintenues de maniere stable pendant la croissance vegetative et au cours des cycles de reproduction sexuee suivants. Afin d'identifier les facteurs impliques dans la methylation de novo et dans la methylation de maintenance, nous avons clone le gene masc1 d'a. Immersus, qui presente les caracteristiques d'un gene d'adn-c5-methyltransferase (mtase). Nous avons construit une souche mutante portant une disruption de ce gene (masc1 ) et montre que cette mutation n'affecte ni la viabilite d'a. Immersus, ni la maintenance de la methylation. Les croisements homozygotes pour cette mutation sont steriles, indiquant que la proteine masc1 est indispensable au developpement sexue. Les croisements heterozygotes sont fertiles, mais le mip est aboli dans les noyaux porteurs de la mutation, indiquant que masc1 est indispensable au mip. Cependant, une reactivation du mip est observee dans les noyaux mutants au fil des generations sexuees. Le gene masc1 n'etant pas requis pour la maintenance de la methylation, un autre gene de mtase a ete recherche. Le gene masc2 a ainsi ete clone, puis invalide. Les souches mutantes (masc2 ) sont viables ; les croisements homozygotes sont fertiles. La proteine masc2 n'est pas requise pour la maintenance de la methylation ni pour le mip. Lorsque l'on associe les deux mutations dans un meme noyau, les souches doubles mutantes obtenues sont viables et la methylation y est maintenue, indiquant qu'il n'y a pas d'effet cumulatif des deux mutations. Ces resultats montrent qu'il existe chez a. Immersus au moins une autre mtase.