Etude fonctionnelle du facteur general de transcription tfiiib et de l'initiation de la transcription par l'arn polymerase iii de saccharomyces cerevisiae

• Auteur / Autrice : Jean-Christophe Andrau
• Direction : Michel Werner
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques fondamentales et appliquées
• Date : Soutenance en 1999
• Etablissement(s) : Paris 6

Résumé

La transcription par l'arn polymerase iii est responsable de la synthese de nombreux petits arn impliques notamment dans les processus de traduction et d'epissage. Le recrutement de l'enzyme sur les genes necessite les facteurs generaux de transcription tfiiic et tfiiib. Chez s. Cerevisiae tfiiib est compose de trois sous-unites : tbp, et les sous-unites tfiiib70 et tfiiib90. Une fois recrute en amont des genes de classe iii in vitro, tfiiib est suffisant pour promouvoir des cycles multiples de transcription. La sous-unite tfiiib70 de tfiiib comprend une region n-terminale homologue au facteur general de transcription de l'arn polymerase ii, tfiib, et une region c-terminale specifique a l'arn polymerase iii. Nous avons montre que cette region c-terminale contient un determinant majeur de l'interaction avec la tbp. L'etude de mutants ponctuels in vivo et in vitro a permis de degager des residus critiques pour cette interaction. Des experiences realisees avec des mutants de la tbp nous ont egalement suggere une surface de ce facteur susceptible d'interagir avec la region c-terminale de tfiiib70. Dans une etude in vitro, j'ai pu mettre en evidence une nouvelle activite favorisant le choix du site d'initiation de la transcription sur une position unique pour un gene de classe iii. Cette activite n'est pas essentielle pour la transcription et pourrait intervenir dans l'initiation en favorisant le positionnement de tfiiib a une position donnee en amont du site d'initiation de la transcription. Dans la troisieme partie de ce manuscrit, je presente les resultats d'un crible d'interaction double-hybride du facteur tfiiib70. Parmi les clones obtenus, nous avons pu isoler des fragment du gene tfc4 codant pour la region n-terminale de la sous-unite 131 du facteur tfiiic. D'autres contacts ont ete mis en evidence suggerant un lien entre la transcription par l'arn polymerase iii et des facteurs lies a des processus de repression transciptionnelle et de reparation de l'adn.