Etude de la regulation de l'expression de la terminale deoxynucleotidyl transferase (tdt) chez la souris

• Auteur / Autrice : FRANCOISE NOURRIT
• Direction : Noëlle Doyen
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques fondamentales et appliquées
• Date : Soutenance en 1999
• Etablissement(s) : Paris 6

Résumé

Le gene de la terminal deoxynucleotidyl transferase (tdt) commence a etre exprime chez la souris quelques jours apres la naissance, dans les lymphocytes immatures b et t. Pour rechercher les elements susceptibles de reguler l'expression du gene de la tdt, nous avons evalue son profil de methylation dans des tissus et lignees l'exprimant ou non. Nous avons observe la demethylation d'une region du promoteur associee a la transcription du gene de la tdt. Des experiences de protection a la dnase i ont permis d'identifier trois regions protegees specifiquement par des extraits de cellules tdt+. Nos resultats suggerent donc que la demethylation du promoteur joue un role dans le controle de l'expression de la tdt et que de nouvelles regions du promoteur sont egalement impliquees dans cette regulation. Par ailleurs, l'absence de regions n, ainsi qu'un certain nombre de caracteristiques propres aux rearrangements foetaux ont conduit a proposer l'existence de differentes vagues de precurseurs lymphocytaires durant la vie. Nous avons analyse la descendance d'une unique cellule multipotente, isolee de la splanchnopleure para-aortique, premiere source identifiee de precurseurs chez l'embryon de souris. Apres expansion dans un systeme de culture qui permet l'engagement et la differenciation des precurseurs b, nous avons montre que de grands nombres de precurseurs rearrangeant les genes de chaine lourde des ig sont obtenus et constituent un repertoire aussi divers que celui de l'adulte. Des regions n sont presentes aux jonctions v(d)j, montrant que l'expression de la tdt a ete induite, et n'est pas, par consequent, une propriete intrinseque des cellules souches adultes. Afin d'etendre le profil d'expression de la tdt au cours de l'ontogenie des lymphocytes, nous avons genere des souris transgeniques contenant l'adnc de la tdt sous controle d'elements regulateurs lymphoides. L'expression du transgene se produit pendant le developpement foetal, en consequence, les repertoires potentiels b et t sont modifies, par la presence d'additions n dans les genes des chaines lourdes et legeres des ig ainsi que dans les genes des tcr.