Contribution a l'etude de l'ampc dans les plaquettes et les cellules endotheliales de la microcirculation pulmonaire humaine

• Auteur / Autrice : Ismaïl Elalamy
• Direction : Mohamed Hatmi
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques fondamentales et appliquées
• Date : Soutenance en 1999
• Etablissement(s) : Paris 6

Résumé

Les plaquettes sanguines participent a de nombreux processus physiopathologiques tels que l'hemostase, la thrombose et l'inflammation. Leur reponse est modulee par diverses enzymes assurant la transduction du signal dont les plus importantes sont la phospholipase c(plc), la cyclooxygenase (cox), l'adenylyl cyclase (ac) et les proteines tyrosine kinases (ptk). Ce travail est une contribution a l'etude de l'ampc dans les plaquettes et les cellules endotheliales de la microcirculation pulmonaire humaine (cemph), deux partenaires privilegiees du compartiment vasculaire. Tout d'abord, nous avons etudie l'interaction du recepteur plaquettaire des endoperoxydes cycliques/thromboxane a2 (pgh2/txa2) avec l'ac, enzyme transmembranaire responsable de la synthese d'ampc a partir de l'atp. La desensibilisation de ce recepteur par le u46619, un mimetique du txa2, est etroitement associee a une forte sensibilisation de l'ac. Apres confirmation de ces donnees, nous avons montre que la plc, contrairement aux ptk, est impliquee dans ce processus a un stade precoce precedant l'activation de la pkc. Nous avons montre que cette relation n'existait pas entre le recepteur pgh2/txa2 et la guanylyl cyclase, enzyme responsable de la synthese du gmpc. Ces conditions de synthese accrue d'ampc plaquettaire et la possibilite de sa consequente extrusion dans le milieu extracellulaire, nous ont conduit a explorer son role sur le versant extracellulaire. Le kemptide, substrat synthetique de pk ampc dependante (pka), est phosphoryle en presence de plaquettes (source d'enzyme), d'ampc (activateur de pka) et d'atp (cofacteur de phosphorylation). Le pki, un inhibiteur specifique de pka, empeche cette phosphorylation. L'ampc, accumule a une forte concentration a l'interieur de la cellule, est, en partie, libere induisant ainsi la phosphorylation du kemptide via une ecto-pka. Nous avons identifie sa cible endogene majeure comme etant le cd36. Enfin, nous nous sommes interesses au role eventuel de l'ampc dans la cooperation des plaquettes et des cemph. Nous avons confirme que l'induction de la cox-2 par le pma etait dependante de la voie de la pkc. Nous avons ensuite etabli que l'elevation du taux d'ampc intracellulaire augmente l'expression de la cox-2. En revanche, l'ampc extracellulaire reprime cette induction tant au niveau de la proteine qu'au niveau de son arnm. Ce phenomene, aboli par le pki, suggere l'implication d'une activite pka a la surface des cemph. Nous rapportons, ainsi, des effets biphasiques de l'ampc sur l'expression de la cox-2 endotheliale, dependants de sa disponibilite intra-ou extra-cellulaire. Ces resultats indiquent clairement que l'ampc, connu pour son role dans la transduction du signal intracellulaire, se comporte aussi comme un second messager extracellulaire.