Caracterisation et purification partielle de cdk x, une proteine proche de cdk 1

• Auteur / Autrice : LENAICK DETIVAUD
• Direction : Laurent Meijer
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques fondamentales et appliquées
• Date : Soutenance en 1999
• Etablissement(s) : Paris 6

Résumé

Les cdks (kinases cycline-dependantes) constituent une famille de proteines kinases dont le nombre d'elements identifies ne cesse de croitre. Ces cdks ont ete d'abord identifiees comme molecules cles du cycle cellulaire. L'implication de certaines d'entre elles dans d'autres fonctions et la decouverte de cdks et homologues dans des tissus bien differencies permettent d'envisager un spectre d'action plus large pour ces proteines kinases. Nous avons etudie une nouvelle proteine d'environ 35 kda, et l'activite hmg i kinase qui copurifie sur la resine d'affinite p15 c d k - b p-sepharose. De meme l'utilisation d'un inhibiteur de cdks, le composant hd, immobilise sur billes de sepharose, permet de copurifier cette proteine et l'activite hmg i kinase. Certaines caracteristiques de cette proteine reconnue par l'anticorps anti-pstaire (le motif pstaire est tres conserve dans la famille des cdks et homologues) et de cette hmg i kinase, nous permettent de penser qu'il s'agit d'une nouvelle cdk que nous avons nommee cdkx. Cdkx, comme l'activite hmg i kinase copurifiee, semble impliquee dans le developpement embryonnaire. Nous avons aussi etudie l'interaction p15 c d k - b p et cdks. Cette proteine de 15 kda purifiee et clonee dans notre laboratoire, presente une affinite vis a vis de cdkx, de cdk4, 5, 6, 8 et de pho85, un homologue de cdc28 de levure s. Cerevisiae. La proteine p15 c d k - b p n'est pas un inhibiteur de cdk. Elle presente de faibles homologies de sequences avec les proteines de la famille suc1/cks. Parallelement, nous avons mis au point une purification partielle de cdkx a partir d'ovocytes d'etoile de mer, bloques en prophase i de la meiose. Cette purification fait appel a une chromatographie d'affinite (greena-agarose), a une double precipitation au sulfate d'ammonium, a une chromatographie echangeuse d'ion (high-s) et une chromatographie d'affinite (hd-sepharose). Finalement, nous avons utilise certains inhibiteurs de cdks comme outils moleculaires en chromatographie d'affinite.