Séparations énantiosélectives du tryptophane et de la kynurénine par des méthodes à membrane

• Auteur / Autrice : Florence Garnier
• Direction : Jérôme Randon
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences. Analyse Physico-chimique. Chimie analytique
• Date : Soutenance en 1999
• Etablissement(s) : Lyon 1
• Ecole(s) doctorale(s) : École Doctorale de Chimie (Lyon2004-....)
• Jury : Examinateurs / Examinatrices : Jérôme Randon

Mots clés

Mots clés contrôlés

Complexation

Albumines

Énantiomères

Chiralité

Séparation par membranes

Tryptophane

Résumé

Les methodes de separations chirales par membrane necessitent la prise en compte aussi bien des contraintes propres a la filtration que des contraintes liees a la reconnaissance enantioselective. Ces deux aspects ont ete developpes pour la separation des isomeres du tryptophane et de la kynurenine en utilisant l'albumine de serum de buf (bsa) comme selecteur chiral. Le mecanisme de reconnaissance enantioselective des formes d et l du tryptophane et de la kynurenine par l'albumine, a ete etudie en utilisant une colonne de chromatographie en phase liquide constituee d'albumine greffee sur de la silice, dans le cas de l'albumine immobilisee. Un systeme de filtration par membrane a permis d'etudier ce mecanisme lorsque l'albumine est sous forme libre en solution. Ces deux etudes se sont revelees necessaires car les proprietes de la proteine immobilisee sur un support peuvent etre differentes de celles de l'albumine libre en solution, du fait de leur difference d'environnement, de conformation et d'accessibilite des sites d'interaction. Deux types d'interactions ont ainsi ete mis en evidence : - une interaction de nature hydrophobe sans reconnaissance enantioselective, - une interaction competitive entre les enantiomeres d et l sur un seul site de l'albumine avec une forte reconnaissance enantioselective, la forme l possedant toujours une constante de complexation superieure a celle de la forme d. Les separations enantiomeriques par membrane realisees en solution ont ete optimisees afin d'ameliorer la selectivite et/ou le rendement des deux acides amines pour un systeme en solution. Une purete et un rendement superieurs a 80% peuvent etre obtenus pour d. Des membranes enantioselectives ont ete preparees par greffage de l'albumine sur du nylon. La cinetique de transfert de masse sous l'effet d'un gradient de concentration et la selectivite de ces membranes ont ete etudiees en fonction de la taille des pores de la membrane support et du mode de greffage de la proteine.