Recherche Avancée

Thèse soutenue

Apport des PKH à l'étude de la chimiorésistance

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Auteur / Autrice : Jean Boutonnat
Direction : Daniel Seigneurin
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Biologie
Date : Soutenance en 1999
Etablissement(s) : Université Joseph Fourier (Grenoble ; 1971-2015)

Résumé

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L'etude de la proliferation cellulaire represente l'un des objectifs les plus importants en pathologie tumorale. Les pkh sont des intercalants membranaires fluorescents. Lors de la division cellulaire, chaque cellule fille recoit la moitie du fluorochrome reduisant ainsi de moitie la fluorescence par rapport a la cellule parentale. Les travaux decrivant l'emploi des pkh pour l'evaluation de la proliferation etant rare, il nous a semble interessant d'explorer les possibilites de ces fluorochromes pour l'analyse de la proliferation dans un contexte de chimioresistance. Nous avons demontre que ces fluorochromes ne sont pas des substrats pour les proteines trans-membranaires pgp et mrp et qu'ils ne modifient pas l'expression ou la fonction de ces proteines. Nous avons note des restrictions quant a l'emploi de certaines associations cytostatiques/pkh, fluorochromes/pkh. En effet, la daunorubicine ne peut etre additionnee immediatement apres le marquage par le pkh67 car une necrose importante est induite. D'autre part, si l'analyse simultanee de la proliferation et de l'apoptose est realisee par l'annexinev, nous avons mis en evidence l'existence d'une fraction de cellules apoptotiques legerement plus faible si les cellules sont prealablement marquees par le pkh67. Nous pensons egalement qu'il est utile d'associer a l'emploi des pkh un marqueur d'integrite membranaire ; en effet nous avons montre l'existence d'une decroissance de la fluorescence liee au pkh lorsque les cellules sont en necrose pouvant simuler une proliferation cellulaire. Leurs applications a l'analyse de la proliferation des lmnh ou des lam montrent une bonne concordance avec l'analyse des cellules en phase s mesuree par incorporation de thymidine tritiee ou de brdurd. Les pkh sont caracterises par l'absence d'effet sur l'adherence cellulaire et l'absence d'echange intercellulaire et peuvent donc etre utilises pour l'evaluation spatio-temporelle de la migration et de la proliferation cellulaire.