Thèse soutenue

Purification et caractérisation de la carboxypeptidase basique membranaire de la muqueuse intestinale de porc

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Auteur / Autrice : Florence Dalle Ore-Dedeyan
Direction : Antoine Puigserver
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Nutrition, aspects cellulaires et moléculaires
Date : Soutenance en 1999
Etablissement(s) : Aix-Marseille 3

Mots clés

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Mots clés contrôlés

Résumé

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La muqueuse intestinale de porc contient une activite carboxypeptidasique qui est apparemment due a deux enzymes differentes responsables de la liberation des acides amines basiques a partir de l'extremite c-terminale de petits peptides. En effet, nous avons detecte une carboxypeptidase membranaire de ph optimum neutre, activee par le cocl 2 et inhibee par l'acide guanidinoethylmercaptosuccinique, l'o-phenanthroline, l'acide ethylenediamine tetraacetique et l'acetate de cadmium, ainsi qu'une carboxypeptidase soluble possedant une activite optimale a ph 5 et peu affectee par le cocl 2, l'o-phenanthroline, l'acide ethylenediamine tetraacetique, le nicl 2 et le cdcl 2. Cette derniere activite serait due a la cathepsine b lysosomale qui est effectivement presente dans la fraction soluble de la muqueuse intestinale de porc. Nous n'avons donc pas caracterise cette enzyme qui n'est pas une metallocarboxypeptidase. L'activite de la carboxypeptidase membranaire est distribuee de facon homogene le long de l'intestin grele. Contrairement a la carboxypeptidase m presente dans de nombreux tissus et organes, la carboxypeptidase membranaire de l'intestin de porc n'est pas ancree par un segment phosphatidylinositol car elle est resistante a la phospholipase c phosphatidylinositol-specifique, mais egalement solubilisee en memes proportions par differents detergents. La purification de la forme solubilisee par la trypsine permet d'obtenir une glycoproteine de 200 kda, ce qui la differencie de la carboxypeptidase m purifiee a partir de placenta humain (62 kda), resultat confirme par l'analyse immunologique. De plus, cette enzyme libere preferentiellement la lysine a l'arginine, contrairement a la carboxypeptidase m. La carboxypeptidase membranaire de la muqueuse intestinale de porc est donc differente de la carboxypeptidase m. Les caracteristiques de cette enzyme sont semblables a celles de la carboxypeptidase d, un nouveau membre de la famille des metallocarboxypeptidases decrit recemment.