Contribution à l'étude de deux lipases extracellulaires issues de souches fongiques isolées à partir du fruit de palme

• Auteur / Autrice : Abel Hiol
• Direction : Louis-Claude Comeau
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Biochimie de la nutrition "aspects moléculaires et cellulaires"
• Date : Soutenance en 1999
• Etablissement(s) : Aix-Marseille 3

Mots clés

Mots clés contrôlés

Production

Purification

Lipases

Acidification

Huile de palme

Résumé

L'acidification enzymatique de l'huile de palme est l'un des problemes cruciaux rencontres par cette huile tropicale qui occupe la premiere place dans les echanges mondiaux en oleagineux. Dans la premiere partie de ce travail, nous avons isole du fruit de palme plusieurs microorganismes lipolytiques. Notre attention s'est portee sur deux souches tres actives sur les triglycerides, qui se sont averees comme des contaminants majeurs de notre echantillonnage. Il s'agit de mucor hiemalis f. Hiemalis et rhizopus oryzae. Pour chacune des deux souches, nous avons optimise la production de la lipase extracellulaire en batch ou en fermenteur. Dans la seconde partie de ce travail, nous avons purifie la lipase extracellulaire de mucor hiemalis f. Hiemalis a l'homogeneite en trois etapes de chromatographie precedees d'une etape de fractionnement au sulfate d'ammonium. L'enzyme a ete purifiee 2200 fois avec une activite specifique sur tricaprilyne de 6153 moles/min/mg. L'enzyme est une glycoproteine de 49 kda, de phi 4,6 et active sous forme monomerique. Sur une colonne d'interactions hydrophobes, l'analyse de la lipase montre le profil d'une proteine hydrophile. La sequence n-terminale des 19 premiers residus a ete etablie et ne presente aucune identite de sequence significative avec celle des autres lipases connues. Notre enzyme est une triacylglycerol lipase avec une specificite de substrat large. Elle montre une preference pour les acides gras en position sn-1 et sn-3 et presente une activation interfaciale sur la tributyrine. Par ailleurs, nous avons purifie a l'homogeneite la lipase extracellulaire de rhizopus oryzae. Le facteur de purification obtenu est de 1243 avec une activite specifique de 8700 ui/mg. Notre enzyme a des caracteristiques proches des autres lipases de rhizopus sp. Purifiees. C'est une glycoproteine de 32 kda, avec un phi de l'ordre de 7,6. La sequence n-terminale est identique a celle des autres lipases du meme genre mais presente deux acides amines supplementaires qui pourraient provenir du propeptide. Nos resultats mettent en evidence les caracteristiques de deux lipases pures, tres actives sur les triacylglycerols et potentiellements impliquees dans l'acidification de l'huile de palme.