Etude des pathologies hereditaires du metabolisme du ceramide : developpement de lignees cellulaires humaines immortalisees par sv40

Inborn diseases of ceramide metabolism ; a study on the development of human, sv40-transformed cell lines

• Auteur / Autrice : MARTINE LASSALLE CHATELUT
• Direction : Robert Salvayre
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences médicales
• Date : Soutenance en 1998
• Etablissement(s) : Toulouse 3

Résumé

Le ceramide est un sphingolipide ayant un role de second messager intracellulaire dans la voie de la sphingomyeline-ceramide. Les pathologies du metabolisme du ceramide sont des enzymopathies lysosomales, maladies de surcharge dues au deficit de l'activite de la ceramidase acide (maladie de farber) ou de cofacteurs proteiques impliques dans la degradation du ceramide (deficits en prosaposine ou en saposines). Nous rapportons dans ce travail l'etablissement de nouvelles lignees cellulaires humaines, immortalisees par l'antigene t de sv40, dans le but d'etudier la physiopathologie des lipidoses a ceramide. Dans une premiere partie, nous decrivons la caracterisation phenotypique d'une lignee lymphocytaire t immortalisee par sv40. Cette lignee cd1 et cd4 positive ne necessite pas l'interleukine 2 pour sa croissance et presente la particularite de ne pas exprimer le complexe tcr/cd3 a la membrane, par defaut de chaine. Nous avons egalement obtenu des lignees de fibroblastes cutanes transformes par sv40, provenant de patients atteints de maladie de farber ou de deficit en prosaposine. La transformation n'affecte pas les anomalies metaboliques de ces cellules : defauts enzymatiques, deficits en cofacteurs, defaut de degradation du ceramide issu de la sphingomyeline et elevation de la concentration intracellulaire en ceramide. Pour evaluer celle-ci, nous avons utilise une technique de quantification en masse du ceramide par la dag kinase d'e. Coli permettant un diagnostic rapide de la maladie de farber sur cellules en culture. Enfin, l'etude comparative du devenir d'un analogue fluorescent du ceramide (obtenu par degradation du lr12-sulfatide) et du ceramide naturel radiomarque dans des fibroblastes de farber immortalises a montre que, dans ces cellules, alors que le derive fluorescent peut sortir du lysosome et etre transforme en sphingomyeline, le lipide naturel ne peut pas quitter le compartiment lysosomal ou il s'accumule. Ainsi, le ceramide naturel genere dans le lysosome ne pourrait pas quitter cette organelle ni jouer le role de second messager. Outre leurs retombees dans le diagnostic des sphingolipidoses, ces travaux soulignent l'interet de l'etude de la compartimentation du metabolisme du ceramide a la fois en physiopathologie humaine et pour l'etude de la signalisation cellulaire.