Mutagenese somatique conditionnelle chez la souris et controle spatio-temporel de l'inactivation du gene codant le recepteur des retinoides rxr alpha

• Auteur / Autrice : Jacques Brocard
• Direction : Pierre Chambon
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées
• Date : Soutenance en 1998
• Etablissement(s) : Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008)

Résumé

Au cours de mon travail de these, j'ai participe au developpement d'un systeme de mutagenese somatique conditionnelle chez la souris utilisant la recombinase cre de bacteriophage p1. Cette enzyme excise tout fragment d'adn floxe c'est a dire encadre de sites specifiques appeles loxp. L'introduction de tels sites dans un gene d'interet par recombinaison homologue permet d'obtenir des animaux dont le genotype depend de la presence et de l'activite de la recombinase cre. Nous avons montre que ces deux parametres peuvent etre controles in vivo, en produisant des proteines de fusion entre la recombinase et le domaine de liaison au ligand de recepteurs steroidiens modifies. Les recombinases chimeriques obtenues sont inactives en absence de ligand ou en presence d'hormones naturelles mais excisent efficacement des sequences floxees placees dans le genome, en presence de ligand synthetique. L'utilisation de ces recombinases sous le controle de promoteurs specifiques chez la souris permet la regulation spatio-temporelle de l'inactivation de tout gene d'interet floxe, in vivo. Parmi les recepteurs nucleaires, le recepteur rxr alpha des retinoides (metabolites actifs de la vitamine a) joue un role majeur dans un grand nombre de voies de signalisation. La mort des mutants nuls pour ce recepteur au cours de leur developpement interdit l'attribution d'une fonction specifique a rxr alpha chez l'adulte. En revanche, l'introduction de sites loxp dans le gene codant ce recepteur permet de controler son expression in vivo via l'utilisation du systeme de mutagenese somatique decrit ci-dessus. L'inactivation conditionnelle du recepteur rxr alpha dans l'epiderme de souris adulte permet de preciser sa fonction de mediateur du signal retinoide dans ce tissu, en particulier dans les phenomenes d'hyper-proliferation induits par des applications de retinoides.