Etude de la topographie de la glycophorine a a l'aide d'une sonde transmembranaire photoactivable

Topographical analysis of glycophorin a using a transmembrane photoactivable probe

• Auteur / Autrice : Philippe Garnier
• Direction : Yoichi Nakatani
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées
• Date : Soutenance en 1998
• Etablissement(s) : Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008)

Résumé

L'objectif de cette etude etait d'utiliser une sonde transmembranaire photoactivable pour etudier la topographie des fragments des proteines qui traversent la bicouche des membranes. La proteine membranaire que nous avons choisie comme modele pour developper cette methode est la glycophorine a (gpa), qui est la glycoproteine majeure de la membrane des erythrocytes. Nous avons tout d'abord mis au point la reconstitution de proteoliposomes contenant a la fois la sonde transmembranaire et la gpa. Apres irradiation, nous avons purifie la gpa marquee par la sonde, puis nous l'avons soumise a une hydrolyse enzymatique (trypsine) afin d'isoler son fragment transmembranaire. En utilisant un analogue tritie de la sonde transmembranaire, nous avons determine que 5 a 8% de la gpa avaient ete marques. La derniere etape de cette etude etait la determination des acides amines marques, par sequencage selon la methode d'edman. Les resultats obtenus se sont averes non reproductibles, le marquage semblant avoir eu lieu sur toute la longueur du peptide transmembranaire. Ces resultats sont en grande partie dus au caractere hydrophobe des produits marques par la sonde et a leur faible solubilite dans le solvant utilise lors du sequencage.