Fragments d'anticorps chez escherichia coli : immuno-conjugues recombinants et nouvelle methodologie de phage display appliquee a la selection de fabs humains anti-gp120 du virus vih-1

Antibody fragments in escherichia coli : recombinant immuno-conjuguates and a new phage display method for the selection of anti-hiv gp120 human fabs

• Auteur / Autrice : EMMANUELLE KEMPF
• Direction : Etienne Weiss
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées
• Date : Soutenance en 1998
• Etablissement(s) : Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008)

Résumé

L'expression de fragments d'anticorps recombinants chez e. Coli a constitue une revolution methodologique dans la production des anticorps monoclonaux. L'amplification des chaines legeres (l) et des fragments fd de chaines lourdes (h) puis leur clonage dans un vecteur d'expression permet l'obtention de banques combinatoires de fabs et la production de nouvelles molecules utilisables en diagnostic ou en therapie. La production d'immuno-conjugues chez e. Coli permet l'obtention relativement aisee de molecules marquees de facon homogene. Afin de produire un immuno-conjugue adapte a la detection d'immunoglobulines humaines, nous avons clone les sequences h et l d'anticorps murins issus d'hybridomes. La fusion de ces fragments a une proteine naturellement biotinylee chez e. Coli permet l'obtention de fabs biotinyles. L'optimisation du taux de biotinylation a permis la selection des immuno-conjugues diriges contre les immunoglobulines humaines par simple criblage sur filtre, en presence de streptavidine. Le clonage de banques combinatoires de fabs totalement humains chez e. Coli est une nouvelle voie de production de molecules recombinantes a usage therapeutique. Le systeme phage display est une methode puissante d'obtention d'anticorps de specificite precise. Afin d'isoler des fabs diriges contre la proteine gp120 du virus vih-1, plusieurs banques ont ete construites a partir de lymphocytes peripheriques d'individus seropositifs. Les differentes difficultes rencontrees lors de la mise en place du systeme phage display, nous ont conduits a etablir un nouveau protocole pour la construction des banques combinatoires. La transformation des lymphocytes b par le virus ebv et la selection des clones secretant des anticorps specifiques a l'antigene cible, a permis la construction d'un nouveau type de banque et la selection par phage display de trois fabs anti-gp120.