Contribution à l'étude de la régulation de la voie de biosynthèse de l'ergostérol chez la levure Saccharomyces cerevisiae ; caractérisation des gènes FEN2 et FMS1

A study of ergosterol biosynthesis regulation in yeast saccharomyces cerevisiae. Characterisation of fen2 and fms1 genes

• Auteur / Autrice : Johann Joets
• Direction : Francis Karst
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Biomembranes
• Date : Soutenance en 1998
• Etablissement(s) : Poitiers

Mots clés

Mots clés contrôlés

Stérols

Antifongiques

Résumé

Les mecanismes de regulation de la biosynthese de l'ergosterol sont encore peu compris chez saccharomyces cerevisiae. Pour aborder cette problematique nous avons etudie une souche de levure, cm8, presentant des anomalies de la biosynthese des sterols. Cette souche possede une teneur en sterols reduite par un facteur 6 par rapport a la souche sauvage, les intermediaires de la voie, de meme que les esters y sont indetectables. Malgre cette severe deficience en sterols, la souche resiste a un antifongique inhibiteur de la biosynthese des sterols, le fenpropimorphe. Cette souche est egalement thermosensible. Nous avons montre que le phenotype est la consequence d'une carence en acide mevalonique. Ce compose est un important precurseur des sterols mais egalement de molecules essentielles pour certaines fonctions cellulaires, telles que la transduction des signaux et la proliferation cellulaire. Des detergents sont capables de supprimer certains aspects du phenotype de cm8 tels que la resistance au fenpropimorphe et la thermosensibilite. Nous avons par ailleurs mis en evidence chez cm8 une severe inhibition du transport de la methionine. Ces resultats traduisent des anomalies des fonctions membranaires. Les etudes que nous avons realisees indiquent que plusieurs etapes de la voie de biosynthese des sterols sont affectees dans la souche. L'inhibition la plus critique intervenant a une etape precoce, en amont de la synthese du mevalonate. Les etapes plus tardives catalysees par la lanosterol-14-demethylase et la sam c24-sterolmethyltransferase sont egalement limitantes chez cm8. La faible teneur en sterols resulte ainsi de multiples atteintes de la voie. Sa regulation est donc profondement perturbee. Un gene suppresseur de la deletion du gene fen2 a egalement ete isole. Le gene fms1 exprime sur un vecteur replicatif a copies multiples est capable de restaurer un phenotype sauvage chez cm8. Les analyses informatiques revelent que fms1 presentes 2 homologies significatives. L'une avec les monoamines oxydases au niveau de la region c-terminale de fms1p. La seconde avec la corticosteroid binding protein 1 (cbp1) de candida albicans dans la partie n-terminale de fms1p. L'effet des surexpressions de la maoa humaine ou de cbp1 chez cm8 ont ete etudies. Par ailleurs, nous avons entrepris une etude du metabolisme des steroides chez la levure. Dans l'etat actuel de notre etude, nous pouvons proposer que fen2p pourrait etre un transporteur d'un compose amine. La poursuite de l'analyse approfondie du metabolisme de cm8 nous semble necessaire pour elucider la fonction de ces genes et leurs effets sur la regulation de la voie des sterols.