Etude de la régulation de l'activité transactivatrice de la protéine p53

• Auteur / Autrice : Corinne Venot
• Direction : François Lavelle
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Endocrinologie et interactions cellulaires
• Date : Soutenance en 1998
• Etablissement(s) : Paris 11
• Jury : Président / Présidente : Pierre May
• Jury : Examinateurs / Examinatrices : Pierre May, Bohdan Wasylyk, Pierre Hainaut, Jean Feunteun, Jean-Luc Theillaud
• Jury : Rapporteurs / Rapporteuses : Bohdan Wasylyk, Pierre Hainaut

Mots clés

Mots clés contrôlés

Protéine adaptatrice GRB2

Activation de la transcription

Protéines p53

Biologie cellulaire

Mots clés libres

Pxxp

Résumé

La protéine p53, codée par le gène suppresseur de tumeur p53, est une phosphoprotéine nucléaire dont les fonctions sont altérées dans plus de 50% des cancers humains. L'inactivation de p53 est le résultat soit de mutation/délétion du gène, soit d'interaction avec des protéines virales ou cellulaires. Dans des conditions cellulaires normales, les fonctions de la protéine p53 ne sont requises que lors de stress cellulaires génotoxiques. Dans ce cas, la protéine p53 est capable de bloquer la progression du cycle cellulaire ou d'induire l'apoptose exerçant ainsi un rôle de «gardien du génome». Ces régulations mettent en jeu la fonction de facteur de transcription de p53. En effet, la protéine p53 transactive de nombreux gènes cibles impliqués dans la régulation du cycle cellulaire et l 'apoptose. Etant donné l'importance de l'activité transactivatrice de p53 dans la réalisation de ses fonctions, nous avons étudié certains des mécanismes la régulant. Pour cela nous avons choisi d'étudier la contribution de différents domaines de la protéine p53 à la régulation de son activité transactivatrice : le domaine riche en proline, les sous-domaines d'activation de la transcription et le domaine C-terminal de p53. Nous avons travaillé sur un mutant de délétion du domaine riche en proline de p53 (acides aminés 62 à 93) nommé p53 Δpro. Nous avons comparé les activités transactivatrice de la protéine sauvage et du mutant sur divers promoteurs ainsi que leur capacité à fixer 1'ADN. A 1'aide de ce mutant, nous avons mis en évidence une régulation cellulaire de la liaison à l'ADN de la protéine p53 passant par son domaine riche en proline. Cette régulation cellulaire étant nécessaire à la transactivation d'un gène proapoptotique. Nous avons également montré que la protéine Grb2 pouvait se lier au domaine proline de p53 via ses domaines SH3. La protéine Grb2 pourrait être un des éléments de la régulation cellulaire de p53 préalablement observée. Nous avons également étudié les deux domaines d'activation de la transcription de p53 situé en N-terminal de la protéine. Nous avons observé la contribution relative de chacun de ces domaines dans l'activité transactivatrice de p53. Pour chacune de ces études (domaine proline et domaines d'activation de la transcription, nous avons analysé à la fois 1'activation et la répression de la transcription réalisée par p53. Enfin, à l'aide d'un anticorps simple chaîne (scFv) dirigé contre p53, nous avons observé l'effet de la neutralisation du domaine C-terminal de p53 dans des cellules mammifères sur l'activité transactivatrice de p53. Nous avons pu établir des liens supplémentaires entre activation/répression de la transcription par p53 et ses fonctions physiologiques d'induction de l'arrêt du cycle cellulaire et de 1'apoptose.