Proteines impliquees dans la reponse des racines de medicago sativa au facteur nod secrete par la bacterie symbiotique rhizobium meliloti

Proteins involved in the response of medicago sativa roots to nod factors secreted by the symbiotic bacterium rhizobium meliloti

• Auteur / Autrice : ZORAN MINIC
• Direction : SPENCER BROWN
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
• Date : Soutenance en 1998
• Etablissement(s) : Paris 11

Résumé

Cette these decrit des proteines racinaires de luzerne (medicago sativa) capables d'interagir avec les facteurs nod (lipo-oligosaccharides) produits par la bacterie symbiotique rhizobium meliloti. Dans la premiere partie, on a caracterise des proteines de 24, 36, 60 et 78 kda d'une fraction, membranaire ou soluble, enrichie par chromatographie d'affinite. Leurs proprietes ont ete determinees contre divers facteurs nod. La proteine de 24 kda (chit24) est une nouvelle chitinase-lysozyme acide, co-purifiee avec une proteine pr10 (pathogenesis related protein) dont seul le gene etait decrit ; chit24 hydrolyse tous les facteurs nod, avec une cinetique dependant de la longueur de l'oligosaccharide et de sa sulfatation. La proteine de 36 kda (chit36) clive nodrm-v(s) et a des proprietes des chitinases de classe i. Une proteine membranaire de 60 kda (lec60), ayant des proprietes de type lectine, entre en interaction avec le facteur nod. Le microsequencage suggere qu'il s'agit d'une dihydro-lipo-deshydrogenase. Une bande de 78 kda obtenue avec cette fraction membranaire semble correspondre a une proteine de stress (hsp70). La deuxieme partie traite des proteines-g de type rho pouvant intervenir dans la transduction de signaux par les facteurs nod. Par western blot, immunomarquage et action de toxines cellulaires, quatre proteines, de 18, 34, 40-41 et 54 kda sont respectivement reconnues par les anticorps anti-rac1, -rac2, -rho, -cdc42 ; le doublet 40-41 kda l'est aussi par la toxine b et l'exoenzyme c3 de clostridium. Le microsequencage a montre que la proteine de 40 kda est une aldolase, ce qui a ete verifie enzymatiquement. Le traitement de cultures cellulaires de luzerne par l'exoenzyme c3 detruit les reseaux d'actine. Les etudes avec un anti-rac1 suggerent qu'un homologue de cette famille est associe a l'appareil de golgi. Enfin, un anti-cdc42 marque les microtubules tout au long du cycle cellulaire.