Contribution a l'analyse de la maturation des arn premessagers en relation avec la proliferation cellulaire : mise en evidence de regulations de l'epissage et du transport par la tyrosine kinase c-src

• Auteur / Autrice : PIERRE GONDRAN
• Direction : François Dautry
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
• Date : Soutenance en 1998
• Etablissement(s) : Paris 7

Résumé

Contrairement a la regulation de la transcription, la regulation des etapes post-transcriptionnelles de l'expression genique par les voies de transduction du signal est peu etudiee. Grace a l'utilisation d'un gene rapporteur, le gene murin de la lymphotoxine alpha, adapte a l'etude quantitative de l'epissage et du transport des arn premessagers in vivo, nous avons mis en evidence l'existence d'une regulation de ces deux etapes par la tyrosine kinase src. Lors de la surexpression d'un mutant c-src active par la mutation y527f, le rendement de l'epissage est diminue et la fidelite de la machinerie de transport, ie sa capacite a retenir les arn immatures dans le noyau, est alteree. Cette kinase interagit par son domaine sh3 avec la proteine sam68 qui possede des domaines de fixation a l'arn, ce qui suggere l'existence d'un lien direct entre src et le metabolisme des arn. Dans notre systeme, il s'avere que le domaine sh3 n'est pas necessaire a l'obtention du phenotype. En revanche, nos donnees montrent que, avec le domaine catalytique, le domaine sh2 est necessaire a l'expression d'un phenotype complet. Par ailleurs, nous avons cherche a etablir quelles etapes post-transcriptionnelles etaient limitantes dans le noyau pour l'expression d'une serie de genes. Les proportions entre arn premessagers et arn matures dans le noyau de plusieurs lignees de cellules en culture ont donc ete analysees. Nos resultats donnent une image inattendue du contenu en arn du noyau : loin d'etre les especes predominantes comme il est parfois admis, les arn premessagers s'accumulent peu. En revanche, l'existence d'une population d'arn matures dans la fraction nucleaire montre que, pour un certain nombre de genes, comme beta-actine, le transport de l'arnm vers le cytoplasme est l'etape nucleaire limitante. De plus, cette etape est sensible a la mise en quiescence des cellules, suggerant l'existence d'un lien entre efficacite du transport nucleo-cytoplasmique et proliferation cellulaire.