L'entree de listeria monocytogenes dans les cellules de mammiferes : etude de la proteine inlb

• Auteur / Autrice : LAURENCE BRAUN
• Direction : Pascale Cossart
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
• Date : Soutenance en 1998
• Etablissement(s) : Paris 6

Résumé

Listeria monocytogenes est l'agent etiologique de la listeriose humaine, une infection d'origine alimentaire caracterisee par des encephalites, des meningites, des avortements et dans de rares cas, des gastro-enterites. Une des proprietes essentielles a la virulence de l. Monocytogenes est sa capacite a induire sa propre phagocytose et a penetrer dans les cellules non phagocytaires. Au moins deux genes organises en operon, inla et inlb, sont impliques dans l'entree de l. Monocytogenes dans les cellules en culture. Le premier code pour l'internaline, une proteine de surface necessaire a l'entree dans les cellules epitheliales, dont le recepteur cellulaire est la e-cadherine. Le deuxieme gene code pour inlb, une proteine necessaire a l'entree dans les hepatocytes et de nombreuses autres lignees et a fait l'objet de ce travail. Inlb est associee a la surface de l. Monocytogenes par un type d'attachement nouveau qui fait intervenir les 232 derniers acides amines d'inlb. Cette region est organisee en repetitions en tandem d'environ 80 acides amines commencant par le dipeptide gw. Nous avons montre que ces repetitions gw sont necessaires et suffisantes pour l'association d'inlb a la surface bacterienne. Des repetitions similaires existent dans une nouvelle proteine de surface de l. Monocytogenes, la bacteriolysine ami et dans la lysostaphine de staphylococcus simulans. Lorsqu'inlb est ajoutee de facon exogene, elle est capable de s'associer a la surface de plusieurs bacteries a gram-positif. De plus, cette addition exogene permet l'entree d'un mutant inlb. Nous avons mis a profit cette propriete particuliere d'inlb pour montrer que des bacteries non invasives recouvertes de la proteine purifiee inlb sont internalisees dans les cellules en culture. Des billes de latex recouvertes d'inlb acquierent egalement la capacite d'envahir les cellules, demontrant de facon definitive qu'inlb est suffisante pour induire l'entree de l. Monocytogenes dans les cellules. L'etude des domaines fonctionnels d'inlb a montre que la region de repetitions riches en residus leucine (lrr) est necessaire et suffisante pour stimuler l'entree de bacteries ou billes de latex dans les cellules de mammiferes. De plus, la region lrr purifiee est suffisante pour stimuler l'activite pi 3-kinase requise au cours de l'entree inlb-dependante de l. Monocytogenes, probablement en reponse a l'activation d'un recepteur cellulaire. Par chromatographie d'affinite, nous avons purifie un ligand cellulaire d'inlb, le gclq-r (recepteur de la partie globulaire du clq). L'entree de l. Monocytogenes dans les cellules en culture peut etre inhibee par le clq, un agoniste du gclq-r et par des anticorps specifiques du gclq-r. L'activation de la pi 3-kinase est egalement reduite dans des cellules traitees avec ces anticorps, indiquant que le gclq-r est requis au cours de l'internalisation de l. Monocytogenes.