Recherche Avancée

Thèse soutenue

Caractérisation génétique et biochimique de nouvelles beta-lactamases à spectre étendu chez pseudomonas aeruginosa

FR
Auteur / Autrice : Anne-Typhaine Bouthors-Pinsolle du Bourg
Direction : Vincent Jarlier
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
Date : Soutenance en 1998
Etablissement(s) : Paris 6

Résumé

FR

La production de bêta-lactamases 0 spectre étendu (LSE) représente le mécanisme le plus fréquemment impliqué dans la résistance des entérobactéries aux céphalosporines de troisième génération. Jusqu'en 1993, les LSE appartenaient toutes aux familles TEM et SHV car elles dérivaient des pénicillinases TEM-1, TEM-2 et SHV-1 par mutations ponctuelles. Depuis, de nouvelles LSE n'étant pas reliées à ces enzymes apparaissent chez les entérobactéries, mais également chez pseudomonas aeruginosa, posant des problèmes thérapeutiques importants. C'est le cas des deux enzymes étudiées dans cette thèse : PER-1 et OXA-18. L'étude de la bêta -lactamase PER-1 avait pour objectif de caractériser les relations structure-activité de cette enzyme dont la séquence ne présente que 26% d'identité avec celles des LSE de type TEM. Deux approches ont été développées : la modélisation moléculaire et la mutagenèse dirigée, et la cristallographie. La modélisation moléculaire et la mutagenèse dirigée ont permis de montrer que l'activité de PER-1 vis-à-vis des céphalosporines de troisième génération ne semble pas résulter de la présence d'un nombre limité de résidus spécifiques mais plutôt de la structure d'ensemble du site actif, contrairement à ceux qui a été décrit pour les LSE de type TEM. Afin de confirmer cette hypothèse, nous avons aussi entrepris la purification et la cristallisation de PER-1 en vue de déterminer sa structure cristallographique, qui est en cours d'achèvement. Nous avons également évalué la potentialité de PER-1 a�� évoluer vers la résistance aux inhibiteurs de bêta-lactamases par mutagenèse dirigée. Nous avons montré que si PER-1 devait évoluer vers une telle résistance, ce serait probablement par des mutations ponctuelles différentes de celles décrites pour les enzymes de type TEM. Nous avons aussi recherché le gène bla p e r - 1, initialement décrit en France, dans différentes souches d'entérobactéries et de p. Aeruginosa d'origine hospitalière qui présentaient un phénotype LSE, mais nous ne l'avons retrouvé dans aucune des souches testées. Enfin, nous avons collaboré à la caractérisation d'une autre LSE de p. Aeruginosa : OXA-18, enzyme non reliée à OXA-2 ou à OXA-10, hydrolysant efficacement la ceftazidime mais faiblement l'oxacilline, et dont l'activité est fortement inhibée par l'acide clavulanique.